24小时热门版块排行榜    

查看: 1070  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dcb005

金虫 (著名写手)

[交流] 农杆菌质粒PCR没有结果

我在用根癌农杆菌转基因的时候遇到了这样的问题:前面的过程都进行得很顺利,当我从农杆菌菌落PCR时,得到目的片段,但提取p1303质粒(之前转进去的进行质粒PCR检测目的基因是否转到该质粒上的时候做了好几次都没有出现目的条带。质粒提取没有出问题,就是最后的这步质粒里目的基因的检测怎么也没有出现结果。请问是什么原因?
前期步骤没有问题,就是提完质粒后PCR不出结果


[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:55 ]
回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

不是打击兄弟,这种情况往往是没有转进去,菌夜PCR不准,尤其是农杆菌的,你如果感兴趣可以用你的菌夜扩其他的基因,有时也可以,不知道为什么,我遇到过。

[ Last edited by annwt on 2009-2-11 at 07:14 ]
8楼2009-02-10 10:05:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来生物版~ 2-3 21:21
1. 菌落PCR结果假阳性,就是说不是你的目的片断。
2。你怎么这么确定质粒提取没有问题?
2楼2009-01-24 06:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-3 21:21
1. 用于转农杆菌的质粒,你做PCR或酶切,有你的插入片段吧?
2. 菌落PCR能够P出来,但提质粒后以质粒做模板PCR就没有结果,我觉得很可能还是你提质粒这个过程出了问题。农杆菌提质粒比大肠杆菌要难。质粒PCR出问题的可能性不大。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
3楼2009-01-25 12:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prime2003

银虫 (小有名气)

可能目的片断没有连入载体中
4楼2009-01-26 10:55:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见