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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 农杆菌质粒PCR没有结果
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dcb005

金虫 (著名写手)

[交流] 农杆菌质粒PCR没有结果

我在用根癌农杆菌转基因的时候遇到了这样的问题：前面的过程都进行得很顺利，当我从农杆菌菌落PCR时，得到目的片段，但提取p1303质粒（之前转进去的进行质粒PCR检测目的基因是否转到该质粒上的时候做了好几次都没有出现目的条带。质粒提取没有出问题，就是最后的这步质粒里目的基因的检测怎么也没有出现结果。请问是什么原因？
前期步骤没有问题，就是提完质粒后PCR不出结果

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 12:55 ]
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
1楼 2009-01-21 14:21:48
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prime2003

银虫 (小有名气)
可能目的片断没有连入载体中
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4楼2009-01-26 10:55:51
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来生物版~ 2-3 21:21
1. 菌落PCR结果假阳性，就是说不是你的目的片断。
2。你怎么这么确定质粒提取没有问题？
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2楼2009-01-24 06:09:35
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-3 21:21
1. 用于转农杆菌的质粒，你做PCR或酶切，有你的插入片段吧？
2. 菌落PCR能够P出来，但提质粒后以质粒做模板PCR就没有结果，我觉得很可能还是你提质粒这个过程出了问题。农杆菌提质粒比大肠杆菌要难。质粒PCR出问题的可能性不大。
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
3楼2009-01-25 12:05:06
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wjcasey

铁虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):鼓励新虫,欢迎常来生物版~ 2-3 21:23
菌落PCR容易有假阳性。可能是目的片段没有转进去。
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5楼2009-02-01 22:52:20
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