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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 切片相关 » 怎样配制焦油紫染液？
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灰原哀控

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样配制焦油紫染液？ 已有2人参与

关于焦油紫染色，我在网络上查了很久，发现配方众说纷纭、并未有一个统一的说法，有的人说是配制0.2%的焦油紫比较好，有的人则说0.1%就够了，有的人的配方里加入了乙酸、乙酸钠，有的人没有，把我搞晕了，我想请教一下做过焦油紫染色的大神们，你们实验室的焦油紫染液具体是怎么配制的？染色效果好吗？可以的话顺便请教一下你们实验室石蜡切片的焦油紫染色具体步骤，谢谢！
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1楼 2017-07-05 14:54:52
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
之前有接触了解，正好为你解答一下。

1、焦油紫染液配制：
焦油紫染色液500ml：Buffer A：冰醋酸4.6ml,加水至400ml；BufferB：无水乙酸钠2.72g，加水至100ml。328ml Buffer A与72ml Buffer B混合后用冰乙酸调pH 至4.0。上述溶液加1g焦油紫，充分混匀，静置1周待用。

2、焦油紫染色步骤
1.        大鼠系列层面脑片（离前囟距离为1.60到-4.80mm），每个隔360μm.取一张。
2.        脑片贴在明胶玻片上，37℃烤箱24小时。然后进行染色。
3.        75%酒精 5min。
4.        85%酒精 5min。
5.        95%酒精I 5min。
6.        95%酒精II 5min。
7.        100%酒I 5min。
8.        100%酒精II 8min。
9.        95%酒精3min。
10.    85%酒精3min。
11.    75%酒精3min。
12.    50%酒精3min。
13.    ddH2O过一下。
14.    CV染色液（摇晃）5-10min，视着色深浅而定。
15.    75%酒精过一下。
16.    85%酒精过一下。
17.    95%酒精过一下。
18.    100%酒精I过一下。
19.    100%酒精II过一下。
20.    1:1乙醇/二甲苯5min。
21.    二甲苯I 5min。
22.    二甲苯II 5min。
23.    封片。

也可以参照链接地址：http://blog.sciencenet.cn/blog-266677-312023.html 。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-05 20:04:48
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灰原哀控

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-05 20:04:48
之前有接触了解，正好为你解答一下。

1、焦油紫染液配制：
焦油紫染色液500ml：Buffer A：冰醋酸4.6ml,加水至400ml；BufferB：无水乙酸钠2.72g，加水至100ml。328ml Buffer A与72ml Buffer B混合后用冰乙酸调pH ...

这是网上很多年前的东西，我早就看过了，要是靠谱我早就采纳了

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3楼2017-07-05 23:05:22
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晋鹏

版主 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 灰原哀控 at 2017-07-05 23:05:22
这是网上很多年前的东西，我早就看过了，要是靠谱我早就采纳了
...

确实，网上也有人用，但是我们都这样做的，效果蛮好的。

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4楼2017-07-06 00:06:13
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weipuseo

禁虫 (小有名气)
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5楼2017-07-06 09:31:20
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