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灰原哀控

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样配制焦油紫染液? 已有2人参与

关于焦油紫染色,我在网络上查了很久,发现配方众说纷纭、并未有一个统一的说法,有的人说是配制0.2%的焦油紫比较好,有的人则说0.1%就够了,有的人的配方里加入了乙酸、乙酸钠,有的人没有,把我搞晕了,我想请教一下做过焦油紫染色的大神们,你们实验室的焦油紫染液具体是怎么配制的?染色效果好吗?可以的话顺便请教一下你们实验室石蜡切片的焦油紫染色具体步骤,谢谢!
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晋鹏

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1、焦油紫染液配制:
焦油紫染色液500ml:Buffer A:冰醋酸4.6ml,加水至400ml;BufferB:无水乙酸钠2.72g,加水至100ml。328ml Buffer A与72ml Buffer B混合后用冰乙酸调pH 至4.0。上述溶液加1g焦油紫,充分混匀,静置1周待用。

2、焦油紫染色步骤
1.        大鼠系列层面脑片(离前囟距离为1.60到-4.80mm),每个隔360μm.取一张。
2.        脑片贴在明胶玻片上,37℃烤箱24小时。然后进行染色。
3.        75%酒精 5min。
4.        85%酒精 5min。
5.        95%酒精I 5min。
6.        95%酒精II 5min。
7.        100%酒I 5min。
8.        100%酒精II 8min。
9.        95%酒精3min。
10.    85%酒精3min。
11.    75%酒精3min。
12.    50%酒精3min。
13.    ddH2O过一下。
14.    CV染色液(摇晃)5-10min,视着色深浅而定。
15.    75%酒精过一下。
16.    85%酒精过一下。
17.    95%酒精过一下。
18.    100%酒精I过一下。
19.    100%酒精II过一下。
20.    1:1乙醇/二甲苯5min。
21.    二甲苯I 5min。
22.    二甲苯II 5min。
23.    封片。

也可以参照链接地址:http://blog.sciencenet.cn/blog-266677-312023.html
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-07-05 20:04:48
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灰原哀控

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-05 20:04:48
之前有接触了解,正好为你解答一下。

1、焦油紫染液配制:
焦油紫染色液500ml:Buffer A:冰醋酸4.6ml,加水至400ml;BufferB:无水乙酸钠2.72g,加水至100ml。328ml Buffer A与72ml Buffer B混合后用冰乙酸调pH ...

这是网上很多年前的东西,我早就看过了,要是靠谱我早就采纳了

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3楼2017-07-05 23:05:22
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晋鹏

版主 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 灰原哀控 at 2017-07-05 23:05:22
这是网上很多年前的东西,我早就看过了,要是靠谱我早就采纳了
...

确实,网上也有人用,但是我们都这样做的,效果蛮好的。

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4楼2017-07-06 00:06:13
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weipuseo

禁虫 (小有名气)

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5楼2017-07-06 09:31:20
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