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fozmm

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的基因与egfp融合表达,western blot检测问题~~~ 已有1人参与

之前构建了一个目的基因和egfp基因的融合表达载体,通过荧光显微镜能看到很强的荧光,pcr也都没问题。然后将这个质粒三亲结合表达进蓝藻中,提取总rna,做了pcr验证都没有问题。最近做western blot时遇到问题,尝试了一抗分别用目的基因的和egfp的,最后做出来分子大小都在10kda左右,照理说不应该是两个基因分别表达蛋白的总和嘛~·不知道是怎么回事~~ 求大神指导~~
wb图如下。

目的基因与egfp融合表达,western blot检测问题~~~
2017.06.29.jpg
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主你只贴一张你自己能看懂的图怎么叫虫友们帮你。。。。。
1)图上面有没有阴性对照, 是什么样的阴性对照
2)提蛋白有没有注意蛋白降解
3)你说一抗用目标蛋白和GFP的都分别观察到是10kDa左右有信号, 那么这个“左右”到什么程度? 你的帖子只有一张图, 那么用另外之中一抗的时候信号是个什么样子?
。。。
2楼2017-07-05 20:25:58
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