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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于pET28a纯化

我最近构建了一个pET28a的表达载体。做蛋白纯化时得到的蛋白大部分在沉淀中,且其大小在35KD左右,而靶蛋白的分子量大概16KD,请教这是什么原因?
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36678293

铜虫 (正式写手)


xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 3-27 11:10
这个就奇怪了。你查一下,28a的多克隆位点前面是否有标签(GST,TRX之内的)还有克隆的时候ATG是否在你的目的基因前面。
2楼2009-01-20 00:25:55
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36678293

铜虫 (正式写手)

★ ★
xuehu2008(金币+1):谢谢 1-20 13:54
xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 3-27 11:10
刚看了一下,28a前面没有融合标签,另外,检查一下目的基因后面时候有终止密码,是TAA还是TGA,有些时候TGA是通读的。
3楼2009-01-20 00:27:57
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

是TAA啊,前面也没有融合标签, 不知什么原因?
4楼2009-01-20 13:54:03
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