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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于pET28a纯化
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于pET28a纯化

我最近构建了一个pET28a的表达载体。做蛋白纯化时得到的蛋白大部分在沉淀中，且其大小在35KD左右，而靶蛋白的分子量大概16KD，请教这是什么原因？
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1楼 2009-01-19 23:34:38
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36678293

铜虫 (正式写手)
★
xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 3-27 11:10
这个就奇怪了。你查一下，28a的多克隆位点前面是否有标签（GST,TRX之内的）还有克隆的时候ATG是否在你的目的基因前面。
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2楼2009-01-20 00:25:55
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36678293

铜虫 (正式写手)
★ ★
xuehu2008(金币+1):谢谢 1-20 13:54
xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 3-27 11:10
刚看了一下，28a前面没有融合标签，另外，检查一下目的基因后面时候有终止密码，是TAA还是TGA，有些时候TGA是通读的。
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3楼2009-01-20 00:27:57
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)
是TAA啊，前面也没有融合标签， 不知什么原因？
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4楼2009-01-20 13:54:03
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