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yishinianhua

木虫 (正式写手)

[求助] 抑菌试验求助 已有3人参与

我用共培养法筛选抑菌菌株,即把拮抗菌的上清加到病原菌里过夜培养,以加入培养基为对照,测od值,重复了好多次效果很明显。但是用纸片法和牛津杯法一点效果都没有,和阴性对照效果一样,这是为什么,求大神解答。
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bluecave

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可溶性蛋白扩散性并不差,以前做过的抗菌小肽都没问题,你最好先测出最小抑菌浓度,然后再试牛津杯,涂菌浓度低一些,另外,在放上牛津杯后,最好先在4°预扩散2个小时,防止扩散到位前菌落生长过快导致抑菌效果下降。

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9楼2017-07-10 12:32:07
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yishinianhua at 2017-07-07 16:03:15
我们目前对上清的抑菌物质还没有深入研究,请问您做过类似这种拮抗菌上清中蛋白抑菌这方面的实验吗...

我还没做过类似的,但你可以大量收集上清液用硫酸铵沉淀蛋白,之后SDS-PAGE检测是否是蛋白存在。若有蛋白存在,将沉淀的样品用buffer溶解后再重复抑菌实验(清除了培养基中其他小分子物质),若有效果说明是蛋白的作用

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7楼2017-07-08 03:15:18
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普通回帖
2楼2017-06-28 13:47:06
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123q明

金虫 (小有名气)

牛津杯里面你加了多少的量?
3楼2017-06-29 09:34:28
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yishinianhua

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 123q明 at 2017-06-29 09:34:28
牛津杯里面你加了多少的量?

200微升

发自小木虫Android客户端
4楼2017-06-29 10:55:40
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

有可能抑菌物质不是小分子,可能是蛋白?扩散效率很低
5楼2017-07-07 07:31:13
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yishinianhua

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-07 07:31:13
有可能抑菌物质不是小分子,可能是蛋白?扩散效率很低

我们目前对上清的抑菌物质还没有深入研究,请问您做过类似这种拮抗菌上清中蛋白抑菌这方面的实验吗
6楼2017-07-07 16:03:15
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yishinianhua

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-08 03:15:18
我还没做过类似的,但你可以大量收集上清液用硫酸铵沉淀蛋白,之后SDS-PAGE检测是否是蛋白存在。若有蛋白存在,将沉淀的样品用buffer溶解后再重复抑菌实验(清除了培养基中其他小分子物质),若有效果说明是蛋白的 ...

好的,非常感谢您的建议
8楼2017-07-09 14:08:36
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by bluecave at 2017-07-10 12:32:07
可溶性蛋白扩散性并不差,以前做过的抗菌小肽都没问题,你最好先测出最小抑菌浓度,然后再试牛津杯,涂菌浓度低一些,另外,在放上牛津杯后,最好先在4°预扩散2个小时,防止扩散到位前菌落生长过快导致抑菌效果下降 ...

也有一定道理
10楼2017-07-11 01:46:29
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