24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 509  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] 总蛋白提取 求助

请教个酵母蛋白制备的问题:

能不能用Laemmli SDS上样缓冲液直接裂解酵母细胞,然后取上清直接上样,这样可以吗,那么样品和缓冲液的体积比怎么控制

大家是不是都回家了,请高人指点,谢谢,10个金币相送
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pinene3862

银虫 (正式写手)

★ ★
yaoyaochong(金币+2):我已经开始做了,不过方法和你的一样,我还超声了一会,谢谢 1-19 13:53
我们做酵母是先沉淀酵母,然后悬在一定体积的水里,尽量少吧,取决于细胞浓度。然后加等体积的2x上样缓冲液,煮沸5分钟,离心,上清去电泳。效果不错。
3楼2009-01-18 21:49:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

cooldog520

铜虫 (初入文坛)

★ ★
yaoyaochong(金币+2):谢谢了,实在是太感谢了 1-19 13:53
我做的E.COLI的全细胞电泳 可以用sample buffer来裂解,上样比是一比一
2楼2009-01-18 16:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cauzhangtao

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-19 21:41
yaoyaochong(金币+2):ths ,不胜感激 1-20 09:09
需要先裂解,再98℃煮5min钟,这样就可以了。我建议你直接电泳。
4楼2009-01-19 19:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-19 21:42
yaoyaochong(金币+2):tks, 这次收集的细胞较多,但愿有好结果 1-20 09:10
PIERCE有专门的裂解液,不过如果不是太在意的话
直接加电泳的loading buffer入细胞(可以离心收集细胞),然后沸水浴5min
buffer当然是宁多勿少了,当然一般加个近百ul都肯定足量的
如果细胞碎片太多,离心后取上清电泳,细胞少就不会出这个问题
5楼2009-01-19 19:42:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +7 land xuxu 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:44 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见