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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 总蛋白提取 求助
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

[交流] 总蛋白提取 求助

请教个酵母蛋白制备的问题：

能不能用Laemmli SDS上样缓冲液直接裂解酵母细胞，然后取上清直接上样，这样可以吗，那么样品和缓冲液的体积比怎么控制

大家是不是都回家了，请高人指点，谢谢，10个金币相送
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1楼 2009-01-18 15:38:53
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cooldog520

铜虫 (初入文坛)
★ ★
yaoyaochong(金币+2):谢谢了，实在是太感谢了 1-19 13:53
我做的E.COLI的全细胞电泳 可以用sample buffer来裂解，上样比是一比一
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2楼2009-01-18 16:48:44
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pinene3862

银虫 (正式写手)
★ ★
yaoyaochong(金币+2):我已经开始做了，不过方法和你的一样，我还超声了一会，谢谢 1-19 13:53
我们做酵母是先沉淀酵母，然后悬在一定体积的水里，尽量少吧，取决于细胞浓度。然后加等体积的2x上样缓冲液，煮沸5分钟，离心，上清去电泳。效果不错。
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3楼2009-01-18 21:49:30
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论，欢迎常来~ 1-19 21:41
yaoyaochong(金币+2):ths ,不胜感激 1-20 09:09
需要先裂解，再98℃煮5min钟，这样就可以了。我建议你直接电泳。
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4楼2009-01-19 19:05:09
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论，欢迎常来~ 1-19 21:42
yaoyaochong(金币+2):tks, 这次收集的细胞较多，但愿有好结果 1-20 09:10
PIERCE有专门的裂解液，不过如果不是太在意的话
直接加电泳的loading buffer入细胞（可以离心收集细胞），然后沸水浴5min
buffer当然是宁多勿少了，当然一般加个近百ul都肯定足量的
如果细胞碎片太多，离心后取上清电泳，细胞少就不会出这个问题
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5楼2009-01-19 19:42:56
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mike9181

银虫 (小有名气)
★ ★
yaoyaochong(金币+2):TKS 2-3 13:37
我提的是细胞壁和细胞内
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6楼2009-01-26 16:22:20
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