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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] PCR无条带

PCR无条带,重新修改了参数,将退火温度降至50℃,且将酶量提高了一倍,50Ul体系加2.5U,但还白的一片,连引物二聚体什么的都没有,怎么办?试剂和引物都是新的,试剂是用的TARAKA的一普通Taq,引物是上海英骏合成的。
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gr0613

铁虫 (初入文坛)

点了marker没有的?也许是你胶的问题呢。
2楼2009-01-17 22:43:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-18 14:33
换个酶,90%的问题是酶的扩增能力问题
引物就算错配都能P出来的
再怎么恶心的体系,酶促反应又不是那么挑剔的
3楼2009-01-17 22:59:44
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含笑~

银虫 (正式写手)

点了marker,marker跑得很漂亮
4楼2009-01-18 09:22:17
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luqing8319


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-18 14:33
模板加多点
或者不加mg离子试试
5楼2009-01-18 12:14:17
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zbq-92

引物有问题没?
可以做个温度梯度再看看
6楼2009-01-18 13:09:13
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

增大模板的量。提高温度。试试看
7楼2009-01-18 13:14:42
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含笑~

银虫 (正式写手)

谢谢兄弟姐妹们!5楼的虫子,引物序列无问题(古菌特有引物:4F 5-TCCGGTTGATCCTGCCRG-3,通用引物:1492R 5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3),很多人都用那对引物,师兄之前也用过,就是不知道合成有无问题。6楼的gg,之前温度是55,没条带,现在降至50了。准备试试菌液PCR
8楼2009-01-18 14:26:02
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含笑~

银虫 (正式写手)

4楼的朋友,可以不加Mg2+吗
9楼2009-01-18 15:27:10
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j2

木虫 (正式写手)

同问!
修炼ing,当虫仙……
10楼2009-01-18 15:59:40
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