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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] PCR无条带

PCR无条带，重新修改了参数，将退火温度降至50℃，且将酶量提高了一倍，50Ul体系加2.5U，但还白的一片，连引物二聚体什么的都没有，怎么办？试剂和引物都是新的，试剂是用的TARAKA的一普通Taq，引物是上海英骏合成的。
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1楼 2009-01-17 22:39:17
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
点了marker没有的？也许是你胶的问题呢。
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2楼2009-01-17 22:43:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论，欢迎常来~ 1-18 14:33
换个酶，90%的问题是酶的扩增能力问题
引物就算错配都能P出来的
再怎么恶心的体系，酶促反应又不是那么挑剔的
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3楼2009-01-17 22:59:44
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含笑~

银虫 (正式写手)
点了marker，marker跑得很漂亮
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4楼2009-01-18 09:22:17
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luqing8319

★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论，欢迎常来~ 1-18 14:33
模板加多点
或者不加mg离子试试
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5楼2009-01-18 12:14:17
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zbq-92

引物有问题没？
可以做个温度梯度再看看
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6楼2009-01-18 13:09:13
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
增大模板的量。提高温度。试试看
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7楼2009-01-18 13:14:42
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含笑~

银虫 (正式写手)
谢谢兄弟姐妹们！5楼的虫子，引物序列无问题（古菌特有引物：4F 5-TCCGGTTGATCCTGCCRG-3，通用引物：1492R 5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3），很多人都用那对引物，师兄之前也用过，就是不知道合成有无问题。6楼的gg,之前温度是55，没条带，现在降至50了。准备试试菌液PCR
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8楼2009-01-18 14:26:02
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含笑~

银虫 (正式写手)
4楼的朋友，可以不加Mg2+吗
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9楼2009-01-18 15:27:10
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j2

木虫 (正式写手)
同问！
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
10楼2009-01-18 15:59:40
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