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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] PCR无条带

PCR无条带,重新修改了参数,将退火温度降至50℃,且将酶量提高了一倍,50Ul体系加2.5U,但还白的一片,连引物二聚体什么的都没有,怎么办?试剂和引物都是新的,试剂是用的TARAKA的一普通Taq,引物是上海英骏合成的。
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chyanqiu

金虫 (小有名气)

我一直用的TAKARA的酶,扩增效果是相当好的,应该没问题;至于Mg2+,TAKARA提供的说明书上会注明需不需要加以及所加量。
    我的建议是,你先将引物跑个电泳,琼脂糖就可以,15min左右,看一下上下游引物带是否存在,或者亮度是否一致,不一致的话要调整。因为,有时候引物合成时,浓度不是他们提供的参数,按照说明书上的加液量溶解,得到的上下游引物浓度相差很大,此时是很难扩增到片段的;还有就是,引物买到之后,溶解之前要离心,使粉末沉降到管底,不然,盖子、管壁上也沾满粉末,开盖之后粉末乱飞,就不是合成的问题了。这些是我和学生们曾经经历过的,呵呵
17楼2009-01-21 09:55:20
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gr0613

铁虫 (初入文坛)

点了marker没有的?也许是你胶的问题呢。
2楼2009-01-17 22:43:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-18 14:33
换个酶,90%的问题是酶的扩增能力问题
引物就算错配都能P出来的
再怎么恶心的体系,酶促反应又不是那么挑剔的
3楼2009-01-17 22:59:44
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含笑~

银虫 (正式写手)

点了marker,marker跑得很漂亮
4楼2009-01-18 09:22:17
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