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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] PCR无条带

PCR无条带，重新修改了参数，将退火温度降至50℃，且将酶量提高了一倍，50Ul体系加2.5U，但还白的一片，连引物二聚体什么的都没有，怎么办？试剂和引物都是新的，试剂是用的TARAKA的一普通Taq，引物是上海英骏合成的。
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1楼 2009-01-17 22:39:17
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chyanqiu

金虫 (小有名气)
我一直用的TAKARA的酶，扩增效果是相当好的，应该没问题；至于Mg2+，TAKARA提供的说明书上会注明需不需要加以及所加量。
    我的建议是，你先将引物跑个电泳，琼脂糖就可以，15min左右，看一下上下游引物带是否存在，或者亮度是否一致，不一致的话要调整。因为，有时候引物合成时，浓度不是他们提供的参数，按照说明书上的加液量溶解，得到的上下游引物浓度相差很大，此时是很难扩增到片段的；还有就是，引物买到之后，溶解之前要离心，使粉末沉降到管底，不然，盖子、管壁上也沾满粉末，开盖之后粉末乱飞，就不是合成的问题了。这些是我和学生们曾经经历过的，呵呵
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17楼2009-01-21 09:55:20
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
点了marker没有的？也许是你胶的问题呢。
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2楼2009-01-17 22:43:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论，欢迎常来~ 1-18 14:33
换个酶，90%的问题是酶的扩增能力问题
引物就算错配都能P出来的
再怎么恶心的体系，酶促反应又不是那么挑剔的
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3楼2009-01-17 22:59:44
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含笑~

银虫 (正式写手)
点了marker，marker跑得很漂亮
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4楼2009-01-18 09:22:17
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