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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] PCR无条带

PCR无条带,重新修改了参数,将退火温度降至50℃,且将酶量提高了一倍,50Ul体系加2.5U,但还白的一片,连引物二聚体什么的都没有,怎么办?试剂和引物都是新的,试剂是用的TARAKA的一普通Taq,引物是上海英骏合成的。
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hanshen81

金虫 (正式写手)

我想你最好是用你的体系,扩别的菌试一下,体系中把你的引物、菌换成别的已经成熟的东西(最好是最近别人做过很成熟的菌、引物),这样才能知道,你的Mg、酶、dNTP、菌量是不是失效或者不合适,在排除这些可能影响因素后,才能去考虑你自己的引物是否有问题、菌是否有问题,之前所有的猜测恐怕都是很耽误时间或者徒劳的
15楼2009-01-20 13:08:37
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gr0613

铁虫 (初入文坛)

点了marker没有的?也许是你胶的问题呢。
2楼2009-01-17 22:43:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-18 14:33
换个酶,90%的问题是酶的扩增能力问题
引物就算错配都能P出来的
再怎么恶心的体系,酶促反应又不是那么挑剔的
3楼2009-01-17 22:59:44
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含笑~

银虫 (正式写手)

点了marker,marker跑得很漂亮
4楼2009-01-18 09:22:17
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