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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR无条带
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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] PCR无条带

PCR无条带，重新修改了参数，将退火温度降至50℃，且将酶量提高了一倍，50Ul体系加2.5U，但还白的一片，连引物二聚体什么的都没有，怎么办？试剂和引物都是新的，试剂是用的TARAKA的一普通Taq，引物是上海英骏合成的。
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1楼 2009-01-17 22:39:17
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论，欢迎常来~ 1-19 21:41
培养到目测可以见浑浊的菌液，25ul PCR体系我加1ul就嫌多了
所以跟模板量无关，也跟什么菌液存在的代谢产物无关，都1/25进去什么都很稀了
用好点的酶绝对可以做出来，好的酶不需要去自己调整什么组分浓度的
温度影响虽然大，但是到50度也可以了看你这对引物
pcDNA3.1的测序引物T7、BGH够短的了，印象中是17个碱基，我52度都出来
有人说56度都能P出来
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14楼2009-01-19 19:47:29
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gr0613

铁虫 (初入文坛)
点了marker没有的？也许是你胶的问题呢。
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2楼2009-01-17 22:43:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论，欢迎常来~ 1-18 14:33
换个酶，90%的问题是酶的扩增能力问题
引物就算错配都能P出来的
再怎么恶心的体系，酶促反应又不是那么挑剔的
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3楼2009-01-17 22:59:44
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含笑~

银虫 (正式写手)
点了marker，marker跑得很漂亮
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4楼2009-01-18 09:22:17
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