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tong5028

金虫 (正式写手)

[交流] 求助翻译

Single-molecule imaging in live cells
Owing to their high photobleaching threshold and the
large separation between the excitation and emission
spectra, QDs provide a very high signal-to-noise ratio,
making them suitable for the long-term tracking of single
molecules [12]. However, many of the approaches used to
distinguish whether or not a signal comes from a single
fluorophore, such as single-step photobleaching, cannot be
applied to QDs owing to high photostability.
The use of another diagnostic approach, FLUORESCENCE
BLINKING of a single QD under continuous wave illumina-
tion, is also hindered by the sensitivity of QD blinking to
changes in excitation intensity [40], temperature [41] and
the surrounding environment [42]. These features alter
blinking characteristics to the extent of eliminating
blinking under some conditions, such as those found in a
reducing environment [43]. Because the cellular environ-
ment is highly reducing, it could potentially make
blinking a poor criterion for identifying single QDs in
live cells. In addition, unlike organic dyes, for which the
blinking interval is about 0.5 ms [44], for QDs this interval
is around 500 ms [40]. In fact, it has been recently reported
that this interval could be asmuch as 100 s for commercially
available avidin-conjugated QDs [43]. Such a long inter-
mittency will prevent the use of QDs to track single
molecules in the cytoplasm of live cells where they diffuse
at about 3 mm2
/s [45]. The above features limit the ability to
establish when a single QD molecule is being observed.
The multivalency of currently available QD bioconju-
gates further precludes their use for labeling only a single
molecule in live cells (Figure 2d,e). This is a major
impediment to studying single molecules because it can
result in a change in the behavior and even functionality
of the molecules. Nevertheless, the ability of QDs to avoid
photodamage and metabolic degradation, their high
quantum yield and the potential to develop approaches
to label single molecules without affecting their function-
ality provide the motivation to design QDs and to develop
imaging strategies that will overcome these limitations.
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1楼 2009-01-17 13:02:56
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尾巴色狼

木虫 (正式写手)

风的音符
★ ★ ★ ★ ★ ★
tong5028(金币+6):THANK YOU~~ 1-17 23:06
在活细胞中单分子成像由于他们很高的光退色临界值及大型分离物之间的激发和发射光谱，量子点提供很高的信噪比让他们适合长期追踪单分子。然而越来越多的方法用来区分是否这个单独的信号来自于单独的荧光团，如单独光退色步骤不能应用于量子点由于它高的耐光性。
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永不言败
2楼2009-01-17 13:33:15
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尾巴色狼

木虫 (正式写手)

风的音符
在活细胞中单分子成像由于他们很高的光退色临界值及大型分离物之间的激发和发射光谱，量子点提供很高的信噪比让他们适合长期追踪单分子。然而越来越多的方法用来区分是否这个单独的信号来自于单独的荧光团，如单独光退色步骤不能应用于量子点由于它高的耐光性。
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永不言败
3楼2009-01-17 14:13:02
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尾巴色狼

木虫 (正式写手)

风的音符
下回有机会吧！没时间了
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永不言败
4楼2009-01-17 14:13:48
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cam967

金虫 (著名写手)
楼主这么有诚意，这金币我赚拉
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5楼2009-01-17 15:56:49
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
tong5028(金币+12):THANK YOU~~ 1-17 23:05
由于活细胞的单分子成像技术有高度的光漂白阈值以及激发光与发射光之间明显的光谱差异，QD 提供了一个非常高的信号－背景噪音比，从而使得该方法适合于长时间的单分子追踪。然而，许多被用于区分一个信号是否来自单一荧光团的方法（例如一步法荧光漂白）因为有高耐光性而不能用于QD。使用另一种鉴定方法——连续波长照射下的单QD荧光闪烁，因为QD闪烁的敏感性随激发强度、温度及周围环境因素改变而无法应用。这些因素对闪烁特征的改变可以严重到在某些条件下（例如还原条件下）清除闪烁。因为细胞环境处于高度的还原态，这种环境可能使荧光闪烁不适宜做活细胞单QD鉴定的指标。另外，不像闪烁间隔约为0.5 ms的器官染色，QD的荧光闪烁间隔大约为500 ms。实际上，最近有报道显示：市场上抗生物素蛋白共轭QD的闪烁间隔可能高到100 s。如此长的间歇使得QD无法应用于捕获活细胞的细胞质内单分子信号（在细胞质内扩散值约为3 mm2/s）。以上特征使得确定什么时候使用单QD分子观察法？？最近获得的QD生物共轭物的多价性进一步排除了它们被用于活细胞单分子标记的可能。这（多价性？）是研究单分子的主要障碍，因为它能改变分子的行为甚至功能。然而，QD能避免光破坏和代谢衰退、高量子产生的优点，以及具有改进出不影响分子功能的单分子标记方法的潜能，给予我们设计QD和改进成像策略的动力。

参考
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6楼2009-01-17 16:26:20
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cam967

金虫 (著名写手)

活细胞单分子成像

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
tong5028(金币+12):THANK YOU~~ 1-17 23:04
因为QDs(量子点超敏荧光试剂盒)光褪色临界值高，激发和发射光谱容易分离，所以它的信噪比很高，非常适于长期追踪单分子。
但是，由于QDs光稳定性好，许多用于区分信号是否来自单个荧光团的方法（如一步光褪色法）是不能用于QD的。
另一种检测方法-荧光闪烁法，也因QD荧光闪烁对激发密度，温度，和周边环境都很敏感无法有效检测。这些因素有时甚至会使荧光闪烁消失，比如在还原性环境中。
而细胞环境具有很高还原性，所以荧光闪烁法是不合适的。
此外，和有机化合物不同，他们的闪烁间隔只有0.5ms，QD的闪烁间隔在500ms左右。事实上，已经商业化的抗生物素蛋白-QD的闪烁间隔为100s.这么长的闪烁间隔会使QD无法跟踪细胞质中的单分子，因为单分子的扩散速度为3 mm2/s
上述这些因素，使确定单分子开始发射信号的时间成为难题。
目前生物-QD由于具有多重化合价，使的QD在活性细胞标记单分子变得更加困难。这是目前研究单分子的最大障碍，因为多化合价会影响分子的行为甚至功能。
不过，由于QD可以避免光破坏和金属降解，量子产额高，以及跟踪单分子却不影响单分子功能的潜力，激励我们去开发QD，并采用新的方法去克服这些弱点
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7楼2009-01-17 16:36:20
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cam967

金虫 (著名写手)
有些匆忙，望大侠指点
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8楼2009-01-17 16:37:02
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