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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菌落（液）PCR
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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] 菌落（液）PCR

要鉴定微生物，需要扩增16S rDNA,现用试剂盒提取菌液的基因组DAN，一是能提出来的扩增不出来，而是部分菌液的DNA提不出来，听说可用菌落（菌液）直接做PCR模板，但好像主要用于质粒，不知道可否做细菌（古菌）16S rDNA的模板？先谢过了！
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1楼 2009-01-16 15:36:02
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
古菌的没有做过，细菌的很好作的，可以直接拿到16S
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-01-16 16:21:34
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lly401064

木虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~欢迎常来生物版~
如果细胞壁不是很厚，就可以
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3楼2009-01-16 18:37:00
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mylove0xy03

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2009-01-16 20:03:05
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含笑~

银虫 (正式写手)
谢谢各位了！能否再说下具体的方法或经典文献？我知道有一种方法是用沸水煮，然后离心取上清做模板。另外对PCR体系等有无特别要求。
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5楼2009-01-17 11:20:09
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cnliu51

金虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+0):多谢参与讨论，欢迎常来生物版~~ 1-19 14:52
lwf991229(金币+1):3Q~ 1-19 14:52
批菌落的方法：50ul纯水于pcr管中，用灭菌牙签挑取待测菌落溶到pcr管的水中，不用很多，管中水略混即可。该管上pcr仪95度15min。取出管，上离心机4000转3min，将菌体离心下来，取上清进行pcr反应，一般10ul体积取1ul即可。
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6楼2009-01-18 05:56:44
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steel1976

★
lwf991229(金币+1):多谢参与讨论，欢迎常来生物版~~ 1-19 14:52
细菌一般都可以的，用小的Tip头，在细菌上直接沾一下，然后放到已配好的反应体系中，吹打几次，直接PCR就行了。我用这种方法鉴定了很多细菌。也有菌液PCR的，就是取一部分菌液做模板
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7楼2009-01-19 08:26:45
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xiongxiong5900

木虫 (小有名气)
支持6楼，我也是这样做的，结果很好
细菌一般都可以的，用小的Tip头，在细菌上直接沾一下，然后放到已配好的反应体系中，吹打几次，直接PCR就行了
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8楼2009-01-19 11:03:16
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jqq1985

银虫 (正式写手)
50ul的PCR体系用1ul菌液就可以做PCR了，如果是菌落，用枪头沾下就可以了。常温菌在PCR预变性时自然裂解。我们这里做基因组时都是这么验证的。
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9楼2009-01-20 15:26:06
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