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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 线性化载体胶回收浓度怎么办？
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yinyuewei530

新虫 (初入文坛)

[求助] 线性化载体胶回收浓度怎么办？ 已有2人参与

我用的诺维赞一步克隆试剂盒，先将表达载体酶切为线性化载体，再利用同源重组原理将目的基因连接到载体上，现在问题是线性化载体胶回收浓度才8.9纳克每微升，插入片段是30纳克每微升，说明书要求线性化载体使用量为0.03pmol，插入片段使用量为0.06pmol，根据我片段计算线性表达载体需要加220纳克，插入片段需要加30纳克，由于表达载体胶回收浓度太低，重组后做转化板子上没有长菌落，请问怎么提高胶回收浓度啊？现在胶回收用的康为试剂盒。下图为酶切之后跑胶图。

线性化载体胶回收浓度怎么办？
IMG_2034.JPG
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1楼 2017-06-20 20:25:05
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purple梦天使

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-20 23:07:42
你的条带挺亮的，切胶的时候尽量切的准确，不要切到过多的空胶。我们实验室用的天根的盒子，回收率还挺高的。

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2楼2017-06-20 22:14:07
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病理小白

新虫 (初入文坛)
第一步放到套件离心后，把离心的液体再次放入滤膜，再次离心

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3楼2017-06-21 12:30:27
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病理小白

新虫 (初入文坛)
最后溶解时，可以把水预热到60度，然后加入溶解

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4楼2017-06-21 12:31:05
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笨猪0503

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一步克隆效率很高的，回收效率低你多扩几管pcr不就可以解决了，祝好
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学习.......
5楼2017-06-21 19:41:03
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笨猪0503

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-21 22:53:48
还有你的条带是单一的，你可以直接过柱子回收，不用跑胶回收，减少跑胶时的损失
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学习.......
6楼2017-06-21 19:43:01
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指尖的枫

木虫 (小有名气)

游学志士
用生工的胶回收试剂盒，按步骤进行即可

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求知若渴，谦卑若愚！
7楼2017-06-22 08:06:28
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zxx911011

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们实验室用的是omega的glass milk的胶回收试剂盒，不用过柱子，感觉回收效率还是挺高的
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8楼2017-08-24 15:23:04
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