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飞鱼~smart

新虫 (初入文坛)

[求助] [求助]如何判断反转之后的cDNA合格与否 分子生物 0 ...已有2人参与

[求助]如何判断反转之后的cDNA合格与否
分子生物 0
飞鱼~smart
2017-06-20 18:03:35
楼主
初始金币 10
如题,判断反转之后cDNA合格与否,除了做荧光定量,可否通过核酸蛋白测定仪测定来判断cDNA合格与否?求大神指点!不胜感激!下面是我测定的一些样品浓度和曲线图!


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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的这个帖子内容乱的不行。。。
一般RNA质量检测之后没问题的话,我们反转录完测一下浓度,然后稀释到200ng/ul左右。取1ul作为模板,用内参基因的引物进行PCR 看条带是否正确 明亮

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
2楼2017-06-20 22:01:27
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飞鱼~smart

新虫 (初入文坛)

额,是挺乱的,可能也跟我在这块的理论知识薄弱有关,这块的基础理论背景资料哪里会有?想补一点是一点 @biostar2009

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3楼2017-06-21 00:57:51
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飞鱼~smart

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-20 22:01:27
你的这个帖子内容乱的不行。。。
一般RNA质量检测之后没问题的话,我们反转录完测一下浓度,然后稀释到200ng/ul左右。取1ul作为模板,用内参基因的引物进行PCR 看条带是否正确 明亮

非常感谢!

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4楼2017-06-21 00:58:10
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
cDNA好坏,你要什么程度的好坏?简单的RT-PCR,接着做个PCR就完事了。
我不认同在RT之后可以通过OD对cDNA定量,这如何进行?cDNA要纯化么?体系里有RNA(即便被RNaseH降解),有NTP,这些都是强烈吸光的物质,然而cDNA又能占到多少比例?不知原理何在。
5楼2017-06-21 13:39:51
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