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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题,请教啊?

最近用tn5转座子筛选目的基因,形成了突变株后克隆全长一直没有结果,另外tn5的序列太长了,后续的酶切没有得到什么片段啊,步移的结果也不好。
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一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

TAIL-PCR.
2楼2009-01-16 10:11:13
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题,请教啊?

没做过,刚上研一不太会,有具体的原理和方法吗,发给我啊谢谢
hljdxyx@yahoo.com.cn
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
3楼2009-01-16 11:11:50
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~欢迎常来~
设计引物,先扩其中卡那抗性基因测序,看是否插进去了,然后在 gene walk,不知道你酶切干嘛,不过先搞清你用的哪个质粒的TN5,卡那基因,有好几个,如果是MINI-TN5,他上面的卡那与报导的基因不对
帮助虫友,提升自己
4楼2009-01-16 12:41:14
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题,请教啊?

我用的是pUT-MINI-TN5这个质粒,这个质粒是别人给我的,没有详细的资料啊,上面有可能有好几个卡那抗性基因吗,看文献上有一个759bp的卡那抗性基因,现在正转杯walk,那个随机性太强,看能不能先酶切,直接回收片段,筛选km阳性克隆子。
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
5楼2009-01-16 21:52:45
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-17 14:55
pUT4-MINI-TN5,他上面的卡那基因不是TN5上的,是TN903上的基因,我根据其序列扩增验证过,你去NCBI搜索一下,我就不贴出来了

[ Last edited by charon1982 on 2009-1-17 at 01:36 ]
帮助虫友,提升自己
6楼2009-01-16 22:08:07
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题,请教啊?

我现在没有这个载体的构造图,把你的pUT4-MINI-TN5载体构造图发给我吧,谢谢啦!
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
7楼2009-01-17 12:10:57
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