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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题，请教啊？
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题，请教啊？

最近用tn5转座子筛选目的基因，形成了突变株后克隆全长一直没有结果，另外tn5的序列太长了，后续的酶切没有得到什么片段啊，步移的结果也不好。
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1楼 2009-01-16 09:10:32
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
TAIL-PCR.
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2楼2009-01-16 10:11:13
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题，请教啊？

没做过，刚上研一不太会，有具体的原理和方法吗，发给我啊谢谢
hljdxyx@yahoo.com.cn
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
3楼2009-01-16 11:11:50
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~欢迎常来~
设计引物，先扩其中卡那抗性基因测序，看是否插进去了，然后在 gene walk,不知道你酶切干嘛，不过先搞清你用的哪个质粒的TN5，卡那基因，有好几个，如果是MINI-TN5，他上面的卡那与报导的基因不对
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帮助虫友，提升自己
4楼2009-01-16 12:41:14
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题，请教啊？

我用的是pUT-MINI-TN5这个质粒，这个质粒是别人给我的，没有详细的资料啊，上面有可能有好几个卡那抗性基因吗，看文献上有一个759bp的卡那抗性基因，现在正转杯walk，那个随机性太强，看能不能先酶切，直接回收片段，筛选km阳性克隆子。
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
5楼2009-01-16 21:52:45
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论,欢迎常来~ 1-17 14:55
pUT4-MINI-TN5，他上面的卡那基因不是TN5上的，是TN903上的基因，我根据其序列扩增验证过，你去NCBI搜索一下，我就不贴出来了

[ Last edited by charon1982 on 2009-1-17 at 01:36 ]
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帮助虫友，提升自己
6楼2009-01-16 22:08:07
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

在tn5转座子插入形成的突变株中克隆基因全长,遇到的问题，请教啊？

我现在没有这个载体的构造图，把你的pUT4-MINI-TN5载体构造图发给我吧，谢谢啦！
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
7楼2009-01-17 12:10:57
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