[交流] 接合转移后单交换与双交换筛选疑问求助 已有1人参与

在无痕敲除的过程中，将含有重组自杀载体pJQ200SK（Gm）的供体菌大肠杆菌S17-1和受体菌假单胞菌A菌株进行接合转移，对于这部分的实验我有几点不明白，还希望懂得以及做过的老师指点一二： 1.S17-1用的LB培养基，受体菌A用的是PM培养基，将两个菌分别培养至对数期之后，按比例进行混合，点种于滤膜上，那么滤膜是应该贴在那个培养基上LB还是PM呢？   2.培养一定时间后，收集滤膜上的菌苔，进行第一次筛选，通过抗性筛选，这个时候我又应该用的是哪个培养基+抗生素，才能筛选得到单交换子？   3.筛选得到单交换子后，如何通过蔗糖进行第二次筛选？具体操作怎么样进行？   （备注：受体菌通常是光照厌氧培养）   这些问题已经困惑很久，参考很多文献，仍有不懂之处，求指教！感激不尽

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