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汕头大学海洋科学接受调剂
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爱总是年轻

新虫 (小有名气)

[交流] 接合转移后单交换与双交换筛选疑问求助 已有1人参与

在无痕敲除的过程中,将含有重组自杀载体pJQ200SK(Gm)的供体菌大肠杆菌S17-1和受体菌假单胞菌A菌株进行接合转移,对于这部分的实验我有几点不明白,还希望懂得以及做过的老师指点一二:
1.S17-1用的LB培养基,受体菌A用的是PM培养基,将两个菌分别培养至对数期之后,按比例进行混合,点种于滤膜上,那么滤膜是应该贴在那个培养基上LB还是PM呢?  
2.培养一定时间后,收集滤膜上的菌苔,进行第一次筛选,通过抗性筛选,这个时候我又应该用的是哪个培养基+抗生素,才能筛选得到单交换子?  
3.筛选得到单交换子后,如何通过蔗糖进行第二次筛选?具体操作怎么样进行?  
(备注:受体菌通常是光照厌氧培养)  
这些问题已经困惑很久,参考很多文献,仍有不懂之处,求指教!感激不尽
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总有人要赢,为什么那个不能是我
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南京南京加油

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
师兄,你的这些问题解决了吗,我现在也做这一块也不算太懂,能不能给我分享一下你的经验和PN培养基配方

发自小木虫Android客户端
2楼2018-05-24 08:10:31
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