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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 农林综合 » 土壤微生物数量测定
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蒋小光

木虫 (小有名气)

[求助] 土壤微生物数量测定 已有1人参与

有没有土壤微生物数量（细菌真菌放线菌）的测定方法，国标或者农业标准？谢谢。

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1楼 2017-06-16 15:02:33
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yeguixiang

新虫 (著名写手)
★
蒋小光(晋鹏代发): 金币+1, 鼓励回帖交流~ 2017-07-24 18:47:46
有微生物鉴定系统这台仪器，可以直接出某种菌数量等等，具体我不太清楚，只是见过。

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5楼2017-07-21 21:46:10
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蒋小光

木虫 (小有名气)
没人么

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2楼2017-06-17 12:53:27
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阿雅丫丫牙

新虫 (初入文坛)
你找到方法了吗？
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3楼2017-07-21 10:25:54
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

涂布平板法

实验器材
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制
　　牛肉膏 0.3g
　　蛋白胨 1g
　　氯化钠 0.5g
　　琼脂 2g
　　自来水 100mL
　　pH 7.0～7.2  　　灭菌 1.05kg/cm2，22min
配制具体步骤
　　1．称量
　　按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
　　2．溶化
　　在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
　　3．调pH
　　在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
　　对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
　　4．过滤
　　趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。很多都是不需要过滤的。
　　5．分装
　　按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。
　　分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
　　(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
　　(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
　　(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
　　6．加塞
　　培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。
　　7．包扎
　　加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
　　8．灭菌
　　将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
　　9．搁置斜面
　　将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
　　10．无菌检查
　　将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。

　　四、实验方法
　　1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。

　　用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
　　2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。
　　（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。
　　（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。
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及时行乐，人生不留遗憾！
4楼2017-07-21 14:29:43
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