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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 高效液相中峰出在了100%有机相里怎么办？
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简佳sunny

铁虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by wqy1234 at 2017-06-18 16:05:46
兄弟你的剃度设计错误了，你好好看看药典及液相，看你有说法是A相是纯乙腈，但是梯度洗脱一般会回到原始梯度的，你的没的回去，铁定是剃度设计错误。

那也就是说，我是不是要从0开始的等度洗脱？

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11楼2017-06-19 08:54:33
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简佳sunny

铁虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 蒹葭往事 at 2017-06-18 21:05:55
你最后那个峰怎么是这样的？你这是标准品怎么会是这样的峰型呢？

我也不知道，现在我也找不出问题是什么了。到底是柱前，柱中，还是柱后的问题。

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12楼2017-06-19 08:56:09
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简佳sunny

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wqy1234 at 2017-06-18 16:05:46
兄弟你的剃度设计错误了，你好好看看药典及液相，看你有说法是A相是纯乙腈，但是梯度洗脱一般会回到原始梯度的，你的没的回去，铁定是剃度设计错误。

原始梯度的意思是不是要从0开始摸液相的条件？是不是要等度洗脱？

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13楼2017-06-19 08:58:36
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鹤立鸡群11

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 简佳sunny at 2017-06-19 08:53:30
我做的是标准品。样品还没做呢 就是这个样子
...

换换流动相

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14楼2017-06-19 11:52:20
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1078235650

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看你的描述后，我认为有问题的地方啊：
1.最后的峰（你描述为100%有机相冲出来的）：看不清横坐标，貌似是60min，和你的洗脱条件对比，你在60min时将有机相从40%在0.01min内增加到100%。如果你的两相都是纯溶剂，而之前脱气不充分或者没有充氮气，有机/无极相突然大比例混合容易造成气泡，所以我怀疑这个峰里有气泡。
2.楼上回帖你说梯度最后是100%有机相是为了下一针：是连续进样吧，但是在设置洗脱条件时，需要在方法里或者每次进样前设置平衡过程。
3.你说前面的峰是溶剂峰：我认为是进样时带的一点点空气，你可以按照流速、柱体积计算一下保留时间。我看到前面有两个峰，你看看哪个是对应的死体积的峰，另一个可能是你的样品（个人猜测）。
4.纵坐标：没用过这公司的机器和软件，不知道纵坐标是否太高了；我用Waters和Agilent的，纵坐标在200 mAU以内。
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15楼2017-06-19 21:41:18
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简佳sunny

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 1078235650 at 2017-06-19 21:41:18
看你的描述后，我认为有问题的地方啊：
1.最后的峰（你描述为100%有机相冲出来的）：看不清横坐标，貌似是60min，和你的洗脱条件对比，你在60min时将有机相从40%在0.01min内增加到100%。如果你的两相都是纯溶剂，而 ...

您好，看了您的回复我有几点想要回答的。
第一，每次脱气的时候我都要脱气两到三次以上，检查机子各个管道没有气泡才停止脱气，所以我想问如果真的有气泡，气泡是从哪里来的？还是进样时带的气泡？还是柱子没有冲干净还得继续冲柱子？
第二，洗脱梯度是在100%的有机相中出峰，请问这个是杂质？还是真的溶剂峰？现在我有一些辨别不出来了。
第三，我可能进样时用的最大体积20ul所以显示出来的峰比较大。

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16楼2017-06-20 09:30:57
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1078235650

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 简佳sunny at 2017-06-20 09:30:57
您好，看了您的回复我有几点想要回答的。
第一，每次脱气的时候我都要脱气两到三次以上，检查机子各个管道没有气泡才停止脱气，所以我想问如果真的有气泡，气泡是从哪里来的？还是进样时带的气泡？还是柱子没有冲干 ...

进样时会有一点点，UPLC不一定；另外有机/无机相大比例混合也会有。
最后的100%时出的，判断不好的话，可以改变进样量，看峰面积变化。
我比较在意的是前面看着不保留的峰，建议根据柱体积和流速计算一下哪个是死体积。
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17楼2017-06-21 08:30:39
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