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简佳sunny

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 高效液相中峰出在了100%有机相里怎么办？已有5人参与

测人参皂苷Rb1的含量用乙腈和水柱温35 波长203 机子是thermo的色谱条件是用的药典的方法但是在最后10min加了一个100%乙腈这样好走下一针但是出来的图谱的东西全在乙腈为100的时候请问是什么原因？请帮我分析一下谢谢各位了

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1楼 2017-06-15 09:34:44

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铁虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

看你的描述后，我认为有问题的地方啊：
1.最后的峰（你描述为100%有机相冲出来的）：看不清横坐标，貌似是60min，和你的洗脱条件对比，你在60min时将有机相从40%在0.01min内增加到100%。如果你的两相都是纯溶剂，而之前脱气不充分或者没有充氮气，有机/无极相突然大比例混合容易造成气泡，所以我怀疑这个峰里有气泡。
2.楼上回帖你说梯度最后是100%有机相是为了下一针：是连续进样吧，但是在设置洗脱条件时，需要在方法里或者每次进样前设置平衡过程。
3.你说前面的峰是溶剂峰：我认为是进样时带的一点点空气，你可以按照流速、柱体积计算一下保留时间。我看到前面有两个峰，你看看哪个是对应的死体积的峰，另一个可能是你的样品（个人猜测）。
4.纵坐标：没用过这公司的机器和软件，不知道纵坐标是否太高了；我用Waters和Agilent的，纵坐标在200 mAU以内。