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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR产物回收产率低
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GinTonic

金虫 (小有名气)

[交流] PCR产物回收产率低

各位虫友，最近不知道咋回事，PCR产物胶回收产率极低，150ul的PCR产物胶回收后只得到100——200ng的目的片段，我的片段在2000bp左右，用的是博大泰克的胶回收kit，都要疯掉了，这么少的量怎么酶切回收啊 。谁能给我点指点啊
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1楼 2009-01-14 22:13:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来！
我用QIAGEN的一直没问题
洗脱的时候，要滴在膜中央，然后静置久一点
第一次洗脱的液体，重新加回柱子，然后再洗脱一次
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2楼2009-01-14 22:32:13
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speculiar

银虫 (小有名气)
是不是乙醇挥发了？
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3楼2009-01-15 10:51:51
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qingxiong

木虫 (正式写手)
加洗脱液后要静止,加热水回收效果也要好些
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4楼2009-01-15 21:12:37
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wujie412

铜虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:10
你看看你的洗脱液的PH值，要大于7才行
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5楼2009-01-15 21:35:43
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GinTonic

金虫 (小有名气)
洗脱液我都用的超纯水，PH值没有在意，多谢了，下次注意下
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6楼2009-01-16 11:54:09
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:10
建议你换一个试剂盒 我一直用的是TAKARA的 博大回收的就是效率不太高
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7楼2009-01-16 12:06:11
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leox863

铁杆木虫 (著名写手)
PCR后从来只做清洁不回收，觉得没有必要，KOD-Plus-产物条带很干净，何必在带上EB，博大的盒子的却也不怎样，用Omega吧。
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simm
8楼2009-01-16 22:00:01
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小小木虫8580

金虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~欢迎常来~
顶一下，天气冷的话用什么试剂盒都效率不高，omega的提取效率不错，

还是要注意温度
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9楼2009-01-16 22:13:24
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GinTonic

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小小木虫8580 at 2009-1-16 22:13:
顶一下，天气冷的话用什么试剂盒都效率不高，omega的提取效率不错，

还是要注意温度

想想也真是有道理啊 我夏天做的时候得率还不错，就是最近一两个月总是得率很低。
只作清洁，指的是过柱还是用专用的kit，还是用酚氯仿抽提？
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10楼2009-01-17 00:56:58
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