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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » T-载体的选择
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pfy323103

新虫 (初入文坛)

[交流] T-载体的选择

请教大家：目的片段5000多bp，连接T载体时，效果TAKARA的T载好还是promega的PGEMX-T Easy好？恳请用过的师兄师姐赐教，不甚感激啦！

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1楼 2017-06-11 20:51:22
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-13 23:01:06
两种都用过，效果都可以，pMD-18T使用方便一点。
如果产物是高保真酶PCR得到的，必须加A： 高保真酶产物纯化后用Taq酶体系72℃反应30min。
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5楼2017-06-12 10:06:52
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pfy323103

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-06-12 10:06:52
两种都用过，效果都可以，pMD-18T使用方便一点。
如果产物是高保真酶PCR得到的，必须加A： 高保真酶产物纯化后用Taq酶体系72℃反应30min。

好的，知道了，非常感谢。现在就是目地片段有点长，连不上去，菌液检测几乎都是假阳性。有没有可能是因为载体放了一年了不太好了（实验室用的是PMD19）？

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9楼2017-06-13 13:31:30
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接连目的载体就完事了。。。
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2楼2017-06-11 21:44:19
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pfy323103

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-06-11 21:44:19
直接连目的载体就完事了。。。

只为测序，因为目的序列是未知。请问用哪个载体好？之前尝试了PMD19-T没有连上
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3楼2017-06-11 21:58:19
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gengxin60
4楼2017-06-11 22:27:42
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-06-12 10:06:52
两种都用过，效果都可以，pMD-18T使用方便一点。
如果产物是高保真酶PCR得到的，必须加A： 高保真酶产物纯化后用Taq酶体系72℃反应30min。

18T，19T 差不多
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6楼2017-06-12 10:08:52
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781055707

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
TAKARA的T载好，主要是人家的酶稳定，T载体反复冻融也稳定。
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2017-06-12 10:26:29
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pfy323103

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 781055707 at 2017-06-12 10:26:29
TAKARA的T载好，主要是人家的酶稳定，T载体反复冻融也稳定。

好的，非常感谢

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8楼2017-06-13 13:22:51
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小狼崽?

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
太长的确实不好连，换个方式吧

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10楼2017-06-13 14:23:44
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