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pfy323103

新虫 (初入文坛)

[交流] T-载体的选择

请教大家:目的片段5000多bp,连接T载体时,效果TAKARA的T载好还是promega的PGEMX-T Easy好?恳请用过的师兄师姐赐教,不甚感激啦!

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Ivy尘

新虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-13 23:01:06
两种都用过,效果都可以,pMD-18T使用方便一点。
如果产物是高保真酶PCR得到的,必须加A: 高保真酶产物纯化后用Taq酶体系72℃反应30min。
5楼2017-06-12 10:06:52
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pfy323103

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-06-12 10:06:52
两种都用过,效果都可以,pMD-18T使用方便一点。
如果产物是高保真酶PCR得到的,必须加A: 高保真酶产物纯化后用Taq酶体系72℃反应30min。

好的,知道了,非常感谢。现在就是目地片段有点长,连不上去,菌液检测几乎都是假阳性。有没有可能是因为载体放了一年了不太好了(实验室用的是PMD19)?

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9楼2017-06-13 13:31:30
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接连目的载体就完事了。。。
2楼2017-06-11 21:44:19
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pfy323103

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-06-11 21:44:19
直接连目的载体就完事了。。。

只为测序,因为目的序列是未知。请问用哪个载体好?之前尝试了PMD19-T没有连上
3楼2017-06-11 21:58:19
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4楼2017-06-11 22:27:42
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Ivy尘 at 2017-06-12 10:06:52
两种都用过,效果都可以,pMD-18T使用方便一点。
如果产物是高保真酶PCR得到的,必须加A: 高保真酶产物纯化后用Taq酶体系72℃反应30min。

18T,19T 差不多
6楼2017-06-12 10:08:52
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781055707

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
TAKARA的T载好,主要是人家的酶稳定,T载体反复冻融也稳定。
采菊东篱下,悠然见南山。
7楼2017-06-12 10:26:29
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pfy323103

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 781055707 at 2017-06-12 10:26:29
TAKARA的T载好,主要是人家的酶稳定,T载体反复冻融也稳定。

好的,非常感谢

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8楼2017-06-13 13:22:51
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小狼崽?

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
太长的确实不好连,换个方式吧

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10楼2017-06-13 14:23:44
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