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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Tail-PCR扩增不出产物，为什么呢？
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sdauxxx

新虫 (小有名气)

[交流] Tail-PCR扩增不出产物，为什么呢？

我现在做禾谷镰刀菌T-DNA插入突变体的TAIL-PCR,可扩了几次都扩不出来，引物好像没什么问题，那位可以给指点一下，不胜感激啊！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:14 ]
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1楼 2009-01-13 15:59:32
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annwt

木虫 (正式写手)
你是用兼并引物吗，
注意的问题：
1，DNA应该完好，最好是新提的，并且不能含有SDS和酚等，那些家伙太讨厌。
2，时间上，程序应该一天跑完，决不能托，
3，技术应该熟练，毕竟不是一管的样，应该加样熟练准确。
4。有时间好好阅读文献，理解步骤的含义。刘的文章很经典。
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2楼2009-01-13 17:22:43
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
tail pcr主要就是简并引物的设计，特异和非特异pcr相结合的一种方法，用来克隆为止的序列，相对于不同物种的对密码子的偏爱，所以简并引物也会有所差异，个人认为还是从引物设计和pcr条件摸索着手。
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-01-15 03:20:01
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
1 你确定突变体是插进去了吗，是否是突变假阳性，设计引物扩增插入序列
2 采用SEFA-PCR，我们一个老师的文章，试剂盒就是这个方法为原理
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帮助虫友，提升自己
4楼2009-01-16 12:50:17
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sdauxxx

新虫 (小有名气)
谢谢了……
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5楼2009-03-27 16:53:47
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