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sdauxxx

新虫 (小有名气)

[交流] Tail-PCR扩增不出产物,为什么呢?

我现在做禾谷镰刀菌T-DNA插入突变体的TAIL-PCR,可扩了几次都扩不出来,引物好像没什么问题,那位可以给指点一下,不胜感激啊!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:14 ]
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annwt

木虫 (正式写手)

你是用兼并引物吗,
注意的问题:
1,DNA应该完好,最好是新提的,并且不能含有SDS和酚等,那些家伙太讨厌。
2,时间上,程序应该一天跑完,决不能托,
3,技术应该熟练,毕竟不是一管的样,应该加样熟练准确。
4。有时间好好阅读文献,理解步骤的含义。刘的文章很经典。
2楼2009-01-13 17:22:43
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

tail pcr主要就是简并引物的设计,特异和非特异pcr相结合的一种方法,用来克隆为止的序列,相对于不同物种的对密码子的偏爱,所以简并引物也会有所差异,个人认为还是从引物设计和pcr条件摸索着手。
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-01-15 03:20:01
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

1 你确定突变体是插进去了吗,是否是突变假阳性,设计引物扩增插入序列
2 采用SEFA-PCR,我们一个老师的文章,试剂盒就是这个方法为原理
帮助虫友,提升自己
4楼2009-01-16 12:50:17
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sdauxxx

新虫 (小有名气)

谢谢了……
5楼2009-03-27 16:53:47
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