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[求助]
请问：有人做过激光共聚焦测组织内游离钙离子含量的实验吗，样品如何处理？
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RT，本人想做组织内游离钙离子含量的测定（下丘脑垂体和肾上腺），我看了下一篇硕士论文样品处理步骤： 1.组织切片制备 大鼠麻醉处死后立即取上述组织（大鼠的小肠，胰腺，骨骼肌及肝脏）放入盛有培养液的振荡切片机固定切片，厚度约200μm，切片用专用毛刷小心移入培养皿备用。 此处的问题是：培养液是指什么？ 2.钙荧光指示剂的制备 用DMSO将配制钙荧光指示剂Fluo-3 AM/乙酸乙酯（Fluo-3/AM）配制为1mol/L原液，-20℃避光保存。F-127用DMSO配制成20%溶液（W/V）。用无血清无分红培养液将Flou-3/AM稀释成最终浓度10μmol/L，并加入0.1%的Pluronic F-127备用。 此处的问题是：这个指示剂后面/乙酸乙酯是什么意思？最后加入F-127的量是多少呢？ 3.检测[Ca2+]I 用PBS冲洗组织切片两遍，并加入10μmol/L染料液1ml，置于37℃的CO2孵箱里避光温育30min。将染色后的各组织切片用PBS液冲洗3遍，加入1ml含胎牛血清的DAEM培养液后置于20倍光学显微镜观察区域及层面，用激光共聚焦观察Flou-3 AM染色的组织细胞的某一层面的荧光图像。启动激光共聚焦显微镜，待检测系统连输硬件及软件程序运行稳定后选择488nm氩离子激光，启动计算机运行laser sharp 2000软件，选择time-course程序设置扫描间隔时间30s，扫描次数100次，连续拍摄图片。 此处问题：请问染料液具体名字是什么？另外此处的程序条件我可以借鉴参考吗？ 结合我的实验，我所取下的组织比较小（下丘脑、垂体、肾上腺），请问我是否可以不用切片直接整个使用？ 求助各位大神，如果能有相关英文文献推荐，小女子感激不尽~！ |
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2楼2017-07-05 00:46:52
