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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用pET28a异源表达蛋白，不挂镍柱，这么回事？
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yghboy168

银虫 (小有名气)

[求助] 用pET28a异源表达蛋白，不挂镍柱，这么回事？ 已有1人参与

用pET28a异源表达蛋白，目的蛋白基因序列已去除起始密码子和终止密码子，不挂镍柱，这么回事？一开始以为是HIS组氨酸标签折叠到了蛋白内部，尝试把蛋白煮过上柱和加尿素不复性直接上柱，都不挂柱子。SDS-PAGE表面蛋白表达量不小，条带清晰。这是怎么回事？
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
1楼 2017-06-06 10:33:45
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铭记于心2222

铜虫 (初入文坛)
buffer是不是有问题？

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2楼2017-06-06 13:07:21
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yghboy168

银虫 (小有名气)
缓冲液没有问题
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
3楼2017-06-08 10:42:19
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lixing4111

新虫 (初入文坛)
最好测序确认一下是不是根本没有表达His-tag，如果测序没问题的话，可以用WB确认一下到底有没有His-tag的表达

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4楼2017-11-10 22:39:25
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

western c端his tag，看蛋白是否表达完整
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5楼2017-11-13 08:49:27
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夜风中的信鸽

新虫 (初入文坛)
是不是移码突变了，导致HIS_TAG表达成了其他东西

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6楼2017-12-16 15:27:18
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xcxxcxxcx_

新虫 (小有名气)
请问楼主解决了吗？我也遇到了这样的问题

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7楼2019-11-21 17:47:41
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JOYOJXu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by yghboy168 at 2017-06-06 10:33:45
用pET28a异源表达蛋白，目的蛋白基因序列已去除起始密码子和终止密码子，不挂镍柱，这么回事？一开始以为是HIS组氨酸标签折叠到了蛋白内部，尝试把蛋白煮过上柱和加尿素不复性直接上柱，都不挂柱子。SDS-PAGE表面蛋 ...

您好，我现在也挂不上柱子，想请问一下您最后是怎么解决的？

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8楼2021-09-10 13:01:08
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