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yghboy168

银虫 (小有名气)

[求助] 用pET28a异源表达蛋白,不挂镍柱,这么回事? 已有1人参与

用pET28a异源表达蛋白,目的蛋白基因序列已去除起始密码子和终止密码子,不挂镍柱,这么回事?一开始以为是HIS组氨酸标签折叠到了蛋白内部,尝试把蛋白煮过上柱和加尿素不复性直接上柱,都不挂柱子。SDS-PAGE表面蛋白表达量不小,条带清晰。这是怎么回事?
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眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
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铭记于心2222

铜虫 (初入文坛)

2楼2017-06-06 13:07:21
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yghboy168

银虫 (小有名气)

缓冲液没有问题
眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
3楼2017-06-08 10:42:19
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lixing4111

新虫 (初入文坛)

最好测序确认一下是不是根本没有表达His-tag,如果测序没问题的话,可以用WB确认一下到底有没有His-tag的表达

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-11-10 22:39:25
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

western c端his tag,看蛋白是否表达完整
5楼2017-11-13 08:49:27
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夜风中的信鸽

新虫 (初入文坛)

是不是移码突变了,导致HIS_TAG表达成了其他东西

发自小木虫Android客户端
6楼2017-12-16 15:27:18
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xcxxcxxcx_

新虫 (小有名气)

请问楼主解决了吗?我也遇到了这样的问题

发自小木虫IOS客户端
7楼2019-11-21 17:47:41
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JOYOJXu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by yghboy168 at 2017-06-06 10:33:45
用pET28a异源表达蛋白,目的蛋白基因序列已去除起始密码子和终止密码子,不挂镍柱,这么回事?一开始以为是HIS组氨酸标签折叠到了蛋白内部,尝试把蛋白煮过上柱和加尿素不复性直接上柱,都不挂柱子。SDS-PAGE表面蛋 ...

您好,我现在也挂不上柱子,想请问一下您最后是怎么解决的?

发自小木虫IOS客户端
8楼2021-09-10 13:01:08
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