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mochenmi铜虫 (小有名气)
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[求助]
his纯化 已有1人参与
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最近做一个his融合蛋白的纯化，载体pET28a。用20mM，40mM，60mM梯度咪唑洗涤，但是洗脱后仍然有很多小的非特异性条带。关键是用his抗体杂交后，这些非特异性条带好像也有微弱信号，不知道为什么？ 而且诱导后这些条带相比于对照较粗，感觉它们也是被诱导出来的，难道这个载体还能表达出不同大小的蛋白？不知道有没有谁遇到过，比较有经验 发自小木虫IOS客户端 |
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zhang001zh
银虫 (小有名气)
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- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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HIS特异性本身不是很高 一般一步纯化的纯度都不太好，需要搭配其他纯化步骤，或者使用亲和力弱一些的beads也可以提高纯度，如果WB都有可能是目的蛋白降解比较严重。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-06-07 22:23:23
15113546664
新虫 (初入文坛)
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- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
mochenmi2楼2017-06-06 09:29:50