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土壤可培养微生物数量培养基相关问题
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本人科研新手一枚，最近在做土壤可培养微生物数量（真菌、细菌和放线菌），真菌的没多大问题，但还是遇到下面一些问题，请各位不吝指教 1 细菌 按照配方没加抑制剂、抗生素什么的，计数时经常发现平板内长有其他杂菌，这种情况怎么避免啊？看到有其他人做时加入50 mg/ml利福平，这个是用无菌水配制还是甲醇？用甲醇对结果没影响？ 2 放线菌 配制放线菌是将其和重铬酸钾分开灭菌，然后再在超净工作台往培养基中加入相应的量，但是这样震荡时倒出的培养基就会有小气泡，这种有可以在灭菌前加的抗生素吗？有什么方法可以减少小气泡？ 谢谢 |
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1：关键看你们实验室买的是不是利福平钠盐，如果是盐就可以用水溶，单纯的利福平，你配以配置成25mg/mL的利福平母液，根据你的终浓度加入母液，采用少量的DMSO先溶解利福平，然后用去离子水定容，立刻摇匀，然后用0.22μm的有机膜过滤除菌，然后分装，-20℃保存。 a：过滤用有机膜过滤，如果DMSO含量高，如果你用水膜过滤会导致你的膜被有机溶剂溶解掉 b：DMSO在8℃就会结冰，会导致你的药品析出来，所以不能单纯的用DMSO溶解，-20℃保存 c：甲醇虽然对菌体抑制程度会高于乙醇，但是你加入量少，所以影响可以忽略不计吧 2：你分开灭培养基和重铬酸钾，你在培养基60℃的时候混匀倒培养基，会出现气泡是由于你摇药瓶用力过大，放线菌分离，你可以在灭菌后，倒板前加入庆大霉素。 |
2楼2017-06-09 11:33:12
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首先，谢谢你的回复。其次，关于你的回复中，我还有点问题想请教： 1：我不确定实验室买的是不是利福平钠盐，但可以确定的是我用去离子水去溶解，在涡旋仪上混合了大概有5分钟左右，仍有很多小颗粒没溶解 b：用少量DMSO溶解，二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，常温下为无色无臭的透明液体，倍称为“万能溶剂”，但其在 高温下有分解现象，这样即使量少，也会或多或少对培养基造成些影响吧 c：我是说用甲醇做为溶剂溶解利福平，但参照上文“甲醇虽然对菌体抑制程度会高于乙醇”，这样看来甲醇作为溶剂对结果影响会很大 2：可能是我再加入重铬酸钾时用力过大，但在灭菌后，倒板前加入庆大霉素这不是一样要摇匀吗？ 新虫一枚，这块实验也是刚接触，若有小白提问，还请不吝赐教！ |
3楼2017-06-09 17:47:48
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1 a.如果不溶那么就是利福平，不是他的钠盐 b.我原来做生物降解，也是用的DMSO，是用DMSO完全溶解的有机物加入培养基当中，对菌体生长有影响，但是比甲醇影响少一些，你这里溶解，开始用少量的DMSO溶解，然后在用水定容，至少这一步就稀释了DMSO的量，其次加入培养基是是1L培养基，加入2mL，影响会更小，所以是没问题的。你这一步用甲醇溶解，由于你加入量少，其实影响也比较小，可以忽略的 2 加入庆大霉素后是要摇匀，你可以适当的在培养基的瓶底放在手上，能在你手心放10秒（实验室这么教的），你就可以加入抗生素，加入时候温度不要太低，或者太高。太低你摇动的时候由于培养基粘度比较大，剧烈摇动之后你的气泡不容易排除，导致你倒培养基的时候，培养基上层不光滑，有气泡。温度太高，你的抗生素会被破坏。你可以用灭过的枪头，将气泡弄到培养基的边缘，这样就不会影响你的涂板 |
4楼2017-06-10 09:23:38
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5楼2017-06-12 00:46:47
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6楼2017-06-12 08:42:24
7楼2017-07-03 21:58:09
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8楼2017-07-04 00:52:31
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我用的是这个培养，感觉还行吧 |
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