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linglan2612

金虫 (正式写手)

[求助] 求助关于枯草芽孢杆菌转化及突变构建的问题 已有2人参与

求助里论坛里做枯草芽孢杆菌转化及突变构建的兄弟姐妹们:
1. 我在进行枯草芽孢杆菌化学转化和电转化的过程中,发现二者的假阳性都非常高,尤其是电转化,请问是什么原因导致?
2. 目前用的突变构建系统是cre-loxp系统,已经做到将pTSC质粒转化入枯草芽孢杆菌,但是发现,将转化筛选后的阳性菌株37度培养16小时(加红霉素),菌株生长缓慢甚至还是清亮的,只好培养48小时,再10的5次方稀释,涂布红霉素10的平板,等长出单菌落后,分别划线于含壮观霉素+红霉素以及只含红霉素的LB平板,但是发现在含壮观霉素+红霉素的平板上,所有单菌落都可以生长,所以没有筛选到阳性菌株。请问大侠们是否我的步骤有问题?
3.能否详述突变构建系统cre-loxp系统的使用方法?我再仔细检查对照到底问题出在哪里?
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任务分解,做好计划,减少情绪对抗
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匿名

本帖仅楼主可见
4楼2017-06-09 15:25:38
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young1983

木虫 (正式写手)

Bacillus难以转化,你的pTSC转化子很可能是假阳性。

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-06-05 22:16:04
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heart920

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

3楼2017-06-09 15:12:59
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jerry110

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
linglan2612: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-06-24 01:07:17
质粒浓度高一些,比如转1ug,划转电转都可以,实验顺利!
5楼2017-06-19 13:35:16
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