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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助关于枯草芽孢杆菌转化及突变构建的问题
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linglan2612

金虫 (正式写手)

[求助] 求助关于枯草芽孢杆菌转化及突变构建的问题 已有2人参与

求助里论坛里做枯草芽孢杆菌转化及突变构建的兄弟姐妹们：
1. 我在进行枯草芽孢杆菌化学转化和电转化的过程中，发现二者的假阳性都非常高，尤其是电转化，请问是什么原因导致？
2. 目前用的突变构建系统是cre-loxp系统，已经做到将pTSC质粒转化入枯草芽孢杆菌，但是发现，将转化筛选后的阳性菌株37度培养16小时（加红霉素），菌株生长缓慢甚至还是清亮的，只好培养48小时，再10的5次方稀释，涂布红霉素10的平板，等长出单菌落后，分别划线于含壮观霉素+红霉素以及只含红霉素的LB平板，但是发现在含壮观霉素+红霉素的平板上，所有单菌落都可以生长，所以没有筛选到阳性菌株。请问大侠们是否我的步骤有问题？
3.能否详述突变构建系统cre-loxp系统的使用方法？我再仔细检查对照到底问题出在哪里？
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1楼 2017-06-05 00:09:02
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young1983

木虫 (正式写手)
Bacillus难以转化，你的pTSC转化子很可能是假阳性。

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-06-05 22:16:04
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heart920

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2017-06-09 15:12:59
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匿名

本帖仅楼主可见
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4楼2017-06-09 15:25:38
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jerry110

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
linglan2612: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-06-24 01:07:17
质粒浓度高一些，比如转1ug，划转电转都可以，实验顺利！
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5楼2017-06-19 13:35:16
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金鱼Unice

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jerry110 at 2017-06-19 13:35:16
质粒浓度高一些，比如转1ug，划转电转都可以，实验顺利！

可以分享一下化转方法吗？转化做了很久还是没有成功，质粒浓度够高，邮箱：1872855914@qq.com，非常感谢！邮箱号也是qq号，方便交流一下吗？跪谢！
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6楼2018-05-30 20:02:20
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农大沐心

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jerry110 at 2017-06-19 13:35:16
质粒浓度高一些，比如转1ug，划转电转都可以，实验顺利！

你好，请问可以分享一下化转的方法吗？谢谢！邮箱18349380556@163.com

发自小木虫Android客户端
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7楼2018-06-24 12:58:59
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青柠檬PCR

新虫 (正式写手)
你好，想问下可以换一个PTSC吗，我们有pdg148，pstop1622
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8楼2019-01-18 12:08:29
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