| 查看: 2302 | 回复: 1 | |||
[交流]
「求助」关于S9／微粒体 体外代谢求指导
|
|
做药物的体外代谢，但是结果不对，怀疑是不是自己的过程步骤中有什么问题，望解答： s9：取肝（-80度冻存 20d）-冰面解冻--10*PBS（1:3）-匀浆（28/s 5min+2min）-离心（4度 9000g 20min）-取上清 -BCA法测定蛋白浓度得：稀释200倍时浓度为1.6mmol／L（后续所采用浓度） 孵育：CTL：10μl pbs+390μl s9 -预孵育（5min 37度）+100μl pbs SAM：10μl 黄嘌呤氧化酶（5mmol／l）+390μl s9-预孵育（5min 37度）- +100μl NADPH体系（nadp+ 2mM、G6P 57mM、G6PD 3.5u、mgcl2 50mM／溶于pbs） -37度孵育（0min、10min、20min、30min、40min、50min、60min、90min、120min） -终止反应（+2ml 冰乙腈 涡旋30s） 离心-lcms测定 实验中遇到的问题：1/匀浆管是否可以带珠子直接离心？ 2/nadph反应体系配置后如何保存留待下一次使用？可以保存多久？ 3/g6pd是买的sigma250u装，是否可以用pbs稀释分装？或如何分装保存？ 4/g6pd的3.5u是指3.5u／ml吧？ 5/我在实验中所配置的nadph反应体系是乳浊液，是不是不对？ 6/PBS中是否需要放蛋白酶抑制剂 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有6人回复
-
明天应该可查了！？
已经有5人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有7人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有8人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
人气不行了
已经有10人回复
-
我面上完蛋了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
|
up 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-06-03 19:37:25
20