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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT后的cDNA分装问题
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yorkham

铜虫 (小有名气)

[交流] RT后的cDNA分装问题

RT后的cDNA分装的200ulPCR管能不能用DEPC水泡过？我师兄说用DEPC水泡过的管放置cDNA 对下步的PCR反应有影响！不明白，大家怎么看？
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1楼 2009-01-12 11:41:25
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
好像不用DEPC吧，直接分装就行，影响不是很大，再说，PCR管之前都是经过处理的（质量好一点的）？
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会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-01-12 20:21:33
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taotao4108

金虫 (正式写手)

无理
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
我这几天一直在做RI相关，已经开始有点烦PCR了

没有必要用DEPC处理，就是有RNase也没有关系，有人在反转录最后一步还加入RNase来降解未反转录完全的RNA，所以说即使用来放cDNA的管子有RNase也没有关系，换一个角度来看，这对我们下一步实验的实验是有百利而无一害
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3楼2009-01-12 21:19:10
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pinene3862

银虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
话说有一种可能是，RT之后形成的是RNA-DNA杂交分子。如果太干净了后面的PCR反而不容易解链。
我们一般20微升反转录之后加等体积的无菌水，放-20度。过一夜，PCR很灵的。
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4楼2009-01-12 23:34:29
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fenyang

银虫 (小有名气)
我师兄在中国农业科学院做客学习的，他说没有问题，且我们的实验结果也没有因此而受影响，这就说明不用DEPC处理亦可以进行PCR反应
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5楼2009-01-13 00:55:02
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yorkham

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pinene3862 at 2009-1-12 23:34:
话说有一种可能是，RT之后形成的是RNA-DNA杂交分子。如果太干净了后面的PCR反而不容易解链。
我们一般20微升反转录之后加等体积的无菌水，放-20度。过一夜，PCR很灵的。

那用DEPC水处理了的管对PCR影响有多大？呵呵，我就是怕到时做不出来了，不过昨天试了试跑ACTIN，结果还可以！
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6楼2009-01-13 14:06:43
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