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yorkham

铜虫 (小有名气)

[交流] RT后的cDNA分装问题

RT后的cDNA分装的200ulPCR管能不能用DEPC水泡过?我师兄说用DEPC水泡过的管放置cDNA 对下步的PCR反应有影响!不明白,大家怎么看?
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

好像不用DEPC吧,直接分装就行,影响不是很大,再说,PCR管之前都是经过处理的(质量好一点的)?
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-01-12 20:21:33
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taotao4108

金虫 (正式写手)

无理


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
我这几天一直在做RI相关,已经开始有点烦PCR了

没有必要用DEPC处理,就是有RNase也没有关系,有人在反转录最后一步还加入RNase来降解未反转录完全的RNA,所以说即使用来放cDNA的管子有RNase也没有关系,换一个角度来看,这对我们下一步实验的实验是有百利而无一害
3楼2009-01-12 21:19:10
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pinene3862

银虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
话说有一种可能是,RT之后形成的是RNA-DNA杂交分子。如果太干净了后面的PCR反而不容易解链。
我们一般20微升反转录之后加等体积的无菌水,放-20度。过一夜,PCR很灵的。
4楼2009-01-12 23:34:29
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fenyang

银虫 (小有名气)

我师兄在中国农业科学院做客学习的,他说没有问题,且我们的实验结果也没有因此而受影响,这就说明不用DEPC处理亦可以进行PCR反应
5楼2009-01-13 00:55:02
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yorkham

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by pinene3862 at 2009-1-12 23:34:
话说有一种可能是,RT之后形成的是RNA-DNA杂交分子。如果太干净了后面的PCR反而不容易解链。
我们一般20微升反转录之后加等体积的无菌水,放-20度。过一夜,PCR很灵的。

那用DEPC水处理了的管对PCR影响有多大?呵呵,我就是怕到时做不出来了,不过昨天试了试跑ACTIN,结果还可以!
6楼2009-01-13 14:06:43
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