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板子长不出菌啊好着急已有3人参与
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我们实验室三个人做基因克隆，一个用的pEASY-blunt克隆载体，用的卡纳的板子，我们俩用的blunt E1表达载体，用的氨苄的板子，但是连接转化涂平板之后都长不出菌是为啥啊！昨天用质粒做了对照，质粒就长了满满一板子，说明感受态没问题啊，操作用的都是同一套，而且三个人谁做都长不出来，实在想不出来是哪里有问题啊……各位师兄师姐帮帮忙啊 发自小木虫Android客户端 |
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sherlock0088
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这么看，PCR没问题，回收没问题，感受态没问题，抗生素没问题，可能载体的问题。你可以换个普通的T载体，别用全式金的，TAKARA或者其他公司的。正常高保真PCR完成后，加入Taq酶72度保温30分钟，回收之后连T载体然后转化感受态。一般来说T载体转化效率挺高的。 发自小木虫Android客户端 |
19楼2017-06-01 19:05:21
sherlock0088
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请详细描述你克隆的过程，包括所用的体系（包括但不限于PCR体系，连接体系），克隆片段长度，产物浓度，A260/A260，A260/A230，nanodrop峰图或吸光度曲线，溶解或回收用的是什么 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-05-31 11:42:58
感谢参与，应助指数 +1
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3楼2017-05-31 12:54:02
4楼2017-05-31 14:31:45