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1002晶晶

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[求助] 请各位大神帮我解答一下，谢谢已有1人参与

载体与目的片段为什么以1:3的比例呢
还有如果构建载体只能选用单酶切，如果保证插入片段的方向性呢

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1楼 2017-05-30 18:24:50

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莫等闲111

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这个要等长出转化子测序才能确定。

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2楼2017-05-30 21:09:56

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2楼: Originally posted by 莫等闲111 at 2017-05-30 21:09:56
这个要等长出转化子测序才能确定。

是回答第一个还是第二个呢？

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3楼2017-05-30 21:21:54

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莫等闲111

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我回答的是第二个

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4楼2017-05-30 21:57:11

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kangaroo0513

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-30 22:40:07

1. 增加任何一反应物的浓度，都有利于反应向正向进行。而反应物浓度过高，会导致ABA形式或者BAB形式的串联，所以，最优组合大概是1:3-3:1
2. 酶切连接的话，单酶切只能通过后续菌PCR或者抽质粒酶切鉴定方向，选方向对的去测序。另外，用同源重组法可以定向向但酶切产物中克隆。

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5楼2017-05-30 22:35:34

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引用回帖:

5楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-05-30 22:35:34
1. 增加任何一反应物的浓度，都有利于反应向正向进行。而反应物浓度过高，会导致ABA形式或者BAB形式的串联，所以，最优组合大概是1:3-3:1
2. 酶切连接的话，单酶切只能通过后续菌PCR或者抽质粒酶切鉴定方向，选方向 ...

谢谢你

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6楼2017-05-31 08:09:24

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