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CindyMo

新虫 (初入文坛)

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[交流] RNAi转染实验已有2人参与

大家好，我最近在做毕设实验，有些疑问想咨询下大家。

细胞是鼻咽癌细胞CNE-2 基因是krupple家族的某个基因

1.我是做RNAI的，目前打算做瞬转和稳转，

瞬转的方案是，打算合成siRNA，通过lipo2000导入细胞。

我想解决的是以下的问题，求助各位大神指点迷津。

瞬转：

1.测转染效率的话，大概什么实验方法比较好一点？

2.如果用带荧光标记的去转染，对转染效率影响大不大？

3.在哪些方面需要特别注意的。

稳转：

我目前查到的有3个质粒选择pcDNA3.1和PGenesil1还有pGPU6/RFP/Neo

然后用G418筛选稳定转染细胞。

有大神用这三个做过实验吗，能否提供一下自己在实验中遇到的问题，或者给些建议。谢谢啦~~

我听有个老师说pGPU6/RFP/Neo在筛选稳定转染细胞的时候比较困难。

还有我还需要知道关于质粒的哪些资料，去查询，然后优化我的实验方案，

因为只有一年的时间，还要准备考研，想提高一下效率，所以实验方面特别谨慎。

求各路大神支招！！！！！！！！

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1楼 2017-05-27 21:54:33

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cindy1217

银虫 (初入文坛)

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Problematic cell line: Probably contaminated. On the basis of the STR profile (PubMed=18196576) it is identical to CNE-1 and seems to be a hybrid of Hela and of cell line of unknow origin. Was originally thought to originate from a nasopharyngeal carcinoma from a male patient.
只是想该诉你一下这个细胞污染了