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老狗妹

新虫 (小有名气)

[求助] Ecoli 表达问题求助 已有1人参与

求助各位表达能手,我在表达蛋白时发现细胞破碎离心后SDS检测蛋白都在沉淀中, 表达体系是shuffle T7, 30° 培养到ID 0.6-0.8之间, 0.5mM IPTG 诱导,18° 诱导过夜,His-tag,ubiquitin, 然后是目的蛋白。 请问我该如何提高solubility呢? 谢谢各位
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莫落

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以换不同的助溶标签,比如MBP,GST,GFP,Trx等,另外可尝试更换冷诱导载体,降低IPTG诱导浓度等;方法有很多,但是不同的蛋白需要进行尝试
2楼2017-05-27 14:34:14
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yujia2015

新虫 (初入文坛)

IPTG的浓度可以再调低一些,用16摄氏度诱导试试
3楼2017-05-27 16:36:47
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