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蛋白纯化 已有1人参与
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大家好： 有一大肠杆菌重组的蛋白，等电点5.0左右。用阴离子交换（DEAE、QFF）目的蛋白均流穿，PB或Tris缓冲液均如此，尝试过改变PH值及缓冲液浓度，效果不大，且流穿峰中杂蛋白也比较多。尝试疏水层析，20%硫酸铵目的蛋白大部分位于上清，30%硫酸铵目的蛋白几乎全部沉淀，但是沉淀蛋白为不可溶状态（缓冲液为PB，用Tris缓冲液溶出蛋白相对较多一些），在20%硫酸铵条件下，目的蛋白不挂柱，依旧流穿。等电点沉淀（PH5.0），蛋白沉淀后复溶不可溶。乙醇沉淀-20%乙醇沉淀蛋白复溶不溶。有没有经验丰富的大神指点迷津，跪谢！ |
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【答案】应助回帖
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pI5.0，pH7.0，在样品预处理(脱盐等)，柱子充分平衡，上样量合适(根据填料吸附量参考)，流速合适。不会不挂柱的。如果操作没有问题，结果不理想。那么既然是重组蛋白，换个镍柱亲和介质试试吧。祝你顺利。 发自小木虫Android客户端 |
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