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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：急！淀粉水解圈实验碰到问题
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agan7176

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助：急！淀粉水解圈实验碰到问题

我想筛淀粉酶活性高的菌株，接种到淀粉为唯一碳源的检测平板上后，菌落生长状况良好，但是加入路戈氏碘液后却没有看到水解圈，这是怎么一会事呢？应该能生长就有利用淀粉作为碳源啊，为啥会看不到水解圈呢，是一点都没有。做过这个实验的虫友们指导下！急

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-14 at 20:07 ]
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1楼 2009-01-11 12:01:23
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
谁说能长就能利用淀粉的啊，还有你的淀粉，很有可能就不纯，还有糖类物质，再说灭菌过程种，淀粉水解变成糖呢
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帮助虫友，提升自己
2楼2009-01-11 13:22:56
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agan7176

铁虫 (小有名气)
谢谢楼上虫友的意见，但是我认为你说的情况中含糖毕竟只是少数
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3楼2009-01-11 19:22:00
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~感谢参与讨论~
也不一定，我们实的可溶性淀粉，我用DNS比过色，至少有5%已经水解了，
你们有刚果红么，可以配培养基的时候加一点，大概0.1-0.2g/L，这样就不用加碘液可以直接活体观察了
本人做的时候水解圈也不是很明显，不过酶活还可
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4楼2009-01-13 13:17:33
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agan7176

铁虫 (小有名气)
谢谢楼上虫友，你测菌液淀粉酶活是怎么测的呢？是用的国标法吗？请多指教
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5楼2009-01-14 18:24:58
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jxjgz

木虫 (小有名气)

我做的也没有透明圈,有也不明显,但用刚果红染色去又有,郁闷!想挑又不知挑哪个....
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知识改变命运， 奋斗成就人生！
6楼2009-01-14 18:33:11
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smallcat227

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by agan7176 at 2009-1-14 18:24:
谢谢楼上虫友，你测菌液淀粉酶活是怎么测的呢？是用的国标法吗？请多指教

DNS比糖，还是比较常用的吧，而且比较简单

菌株液体摇培，取菌悬液离心取上清作为酶液，底物就是可溶性淀粉，在缓冲体系下（PBS，醋酸，柠檬酸个人感觉都可以，pH和温度可以自己摸下，不同菌株都不同）反应30-60min，然后DNS比还原糖就可以了
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7楼2009-01-14 22:43:39
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gogo926

银虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+0):感谢参与讨论~欢迎常来~ 1-17 18:13
lwf991229(金币+1):3Q` 1-17 18:13
我用路戈氏碘液容易把菌体给腐蚀掉
后来用固体碘挥发熏菌落，1分钟就看到了水解圈，你试试看
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8楼2009-01-15 16:30:04
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ruansenlin

★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论~ 1-17 18:13
说明没有淀粉酶！我以前做淀粉酶的，如果外泌的话一定有淀粉酶，没有水解圈，说明还没有筛到菌株。继续努力吧
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9楼2009-01-17 12:00:38
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36678293

铜虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1):感谢参与讨论~ 1-19 00:43
把平板用手套包起来，放到水浴锅里面（60）煮一下（破壁，分泌的话可以直接看，不用煮），在看有没有水解圈，
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10楼2009-01-18 23:16:41
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