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agan7176

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助:急!淀粉水解圈实验碰到问题

我想筛淀粉酶活性高的菌株,接种到淀粉为唯一碳源的检测平板上后,菌落生长状况良好,但是加入路戈氏碘液后却没有看到水解圈,这是怎么一会事呢?应该能生长就有利用淀粉作为碳源啊,为啥会看不到水解圈呢,是一点都没有。做过这个实验的虫友们指导下!急

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-14 at 20:07 ]
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
谁说能长就能利用淀粉的啊,还有你的淀粉,很有可能就不纯,还有糖类物质,再说灭菌过程种,淀粉水解变成糖呢
帮助虫友,提升自己
2楼2009-01-11 13:22:56
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agan7176

铁虫 (小有名气)

谢谢楼上虫友的意见,但是我认为你说的情况中含糖毕竟只是少数
3楼2009-01-11 19:22:00
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smallcat227

木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~感谢参与讨论~
也不一定,我们实的可溶性淀粉,我用DNS比过色,至少有5%已经水解了,
你们有刚果红么,可以配培养基的时候加一点,大概0.1-0.2g/L,这样就不用加碘液可以直接活体观察了
本人做的时候水解圈也不是很明显,不过酶活还可
4楼2009-01-13 13:17:33
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agan7176

铁虫 (小有名气)

谢谢楼上虫友,你测菌液淀粉酶活是怎么测的呢?是用的国标法吗?请多指教
5楼2009-01-14 18:24:58
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jxjgz

木虫 (小有名气)


我做的也没有透明圈,有也不明显,但用刚果红染色去又有,郁闷!想挑又不知挑哪个....
知识改变命运, 奋斗成就人生!
6楼2009-01-14 18:33:11
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smallcat227

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by agan7176 at 2009-1-14 18:24:
谢谢楼上虫友,你测菌液淀粉酶活是怎么测的呢?是用的国标法吗?请多指教

DNS比糖,还是比较常用的吧,而且比较简单

菌株液体摇培,取菌悬液离心取上清作为酶液,底物就是可溶性淀粉,在缓冲体系下(PBS,醋酸,柠檬酸个人感觉都可以,pH和温度可以自己摸下,不同菌株都不同)反应30-60min,然后DNS比还原糖就可以了
7楼2009-01-14 22:43:39
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gogo926

银虫 (小有名气)


lwf991229(金币+0):感谢参与讨论~欢迎常来~ 1-17 18:13
lwf991229(金币+1):3Q` 1-17 18:13
我用路戈氏碘液容易把菌体给腐蚀掉
后来用固体碘挥发熏菌落,1分钟就看到了水解圈,你试试看
8楼2009-01-15 16:30:04
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ruansenlin


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论~ 1-17 18:13
说明没有淀粉酶!我以前做淀粉酶的,如果外泌的话一定有淀粉酶,没有水解圈,说明还没有筛到菌株。继续努力吧
9楼2009-01-17 12:00:38
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36678293

铜虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1):感谢参与讨论~ 1-19 00:43
把平板用手套包起来,放到水浴锅里面(60)煮一下(破壁,分泌的话可以直接看,不用煮),在看有没有水解圈,
10楼2009-01-18 23:16:41
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