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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

做TA克隆,提取重组T质粒后进行双酶切。

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11楼2017-05-21 11:44:54
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胡奎0925

木虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

我是没有解决,我是为了构建载体,我改用同源重组的方法了
宁愿被误会,坚决不解释
12楼2017-05-22 17:00:28
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我好暴躁啊

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 胡奎0925 at 2017-05-22 17:00:28
我是没有解决,我是为了构建载体,我改用同源重组的方法了...

我的载体三千多,目的片段三四千,连了好久,同源也做,各种连,还是没连上

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13楼2017-05-22 22:43:58
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

试试看过夜酶切 快切酶不一定就2小时的 还有就是双切酶的体系 自己再好好斟酌下

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14楼2017-05-22 23:04:02
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Eccentric-

金虫 (小有名气)

15楼2017-05-22 23:10:57
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wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 胡奎0925 at 2017-05-19 08:58:42
我前段也做双酶切,单切都能成功,但双切就是做不出来,我觉得你要确定双切是成功的

我也是,单切都没问题,打算一个一个切

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16楼2017-05-25 12:17:15
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wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2017-05-21 11:44:54
做TA克隆,提取重组T质粒后进行双酶切。
...

我也是,怎么都不行,我做TA克隆了,还是不行

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17楼2017-05-25 12:19:07
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wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

上面的建议我都快试过来了,但就是测序不对,最后一次,再不行,打算换个人做了

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18楼2017-05-25 12:21:55
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柑橘炒鸡蛋

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

亲 你解决了吗?我现在也在做双酶切,转化涂板长的菌特别少,并且还都是假阳性,怀疑是酶切不开的问题,我用的nde1和xho1两个酶37度过夜切,有没有什么好的方法能双酶切都切开啊!!!
19楼2017-08-03 10:29:19
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