24小时热门版块排行榜    

查看: 2937  |  回复: 18

沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

做TA克隆,提取重组T质粒后进行双酶切。

发自小木虫Android客户端
11楼2017-05-21 11:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡奎0925

木虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

我是没有解决,我是为了构建载体,我改用同源重组的方法了
宁愿被误会,坚决不解释
12楼2017-05-22 17:00:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我好暴躁啊

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 胡奎0925 at 2017-05-22 17:00:28
我是没有解决,我是为了构建载体,我改用同源重组的方法了...

我的载体三千多,目的片段三四千,连了好久,同源也做,各种连,还是没连上

发自小木虫Android客户端
13楼2017-05-22 22:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

试试看过夜酶切 快切酶不一定就2小时的 还有就是双切酶的体系 自己再好好斟酌下

发自小木虫Android客户端
14楼2017-05-22 23:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eccentric-

金虫 (小有名气)

15楼2017-05-22 23:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 胡奎0925 at 2017-05-19 08:58:42
我前段也做双酶切,单切都能成功,但双切就是做不出来,我觉得你要确定双切是成功的

我也是,单切都没问题,打算一个一个切

发自小木虫Android客户端
16楼2017-05-25 12:17:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2017-05-21 11:44:54
做TA克隆,提取重组T质粒后进行双酶切。
...

我也是,怎么都不行,我做TA克隆了,还是不行

发自小木虫Android客户端
17楼2017-05-25 12:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wy604987664

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

上面的建议我都快试过来了,但就是测序不对,最后一次,再不行,打算换个人做了

发自小木虫Android客户端
18楼2017-05-25 12:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柑橘炒鸡蛋

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 我好暴躁啊 at 2017-05-21 10:21:34
层主,我现在也在做这个双酶切,有木有好办法确定双切成功,我现在是载体两个酶分开切,而且都是同时用两个酶单酶切,结果是,这俩酶都好使,但是目的基因就没法看是不是酶切成功了,转化后菌长了特别多。怎么改进 ...

亲 你解决了吗?我现在也在做双酶切,转化涂板长的菌特别少,并且还都是假阳性,怀疑是酶切不开的问题,我用的nde1和xho1两个酶37度过夜切,有没有什么好的方法能双酶切都切开啊!!!
19楼2017-08-03 10:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wy604987664 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +5 瞬息宇宙 2026-09-01 11/550 2026-09-02 14:15 by simwe390
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
请填处理意见