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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuevis

铜虫 (小有名气)

[求助] 同源重组,目的基因与同源臂怎么连接? 已有2人参与

想用同源重组的方法将染色体上的一段基因替换掉,构建重组载体时,目的基因与同源臂相连一般采用什么方法,用酶切的话,会引入额外的酶切位点序列,用overlap PCR连接三个基因片段效率会不会很低或者突变比较多啊?各位一般采用什么方法?

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yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wlkpatrick at 2017-05-18 07:21:02
用PCR扩的时候就把同源重组片段引入啊。

同源太长了吧,我看网上说,同源臂要500到1000bp?

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4楼2017-05-18 07:45:33
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
gibson assembly 效率挺高的
2楼2017-05-18 02:57:40
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wlkpatrick

新虫 (初入文坛)

用PCR扩的时候就把同源重组片段引入啊。

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3楼2017-05-18 07:21:02
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szp0401

木虫 (正式写手)

overlap就可以,用保真酶不会引入突变的

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5楼2017-05-18 07:50:56
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