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c269315986

新虫 (初入文坛)

[求助] Ni柱纯化蛋白双峰求助 已有3人参与

请问各位兄弟姐妹,Ni柱纯化蛋白梯度洗脱时出现双峰,分不开,请问是什么原因?以前纯化时是50%洗脱液有单峰,最近纯化就成双峰了,30%,50%。

@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-05-17 15:17:06
恩可以考虑一下是不是蛋白结构发生变化

另外  你的柱子用了多久?有时候柱子用久了也会影响纯化结果的...

谢谢~柱子刚换了新的。。。请问还有没有其他可能的原因导致蛋白结构变化了?

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7楼2017-05-17 18:24:36
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑电泳看一下这两个峰的样品是否都含有你的目的蛋白
2楼2017-05-17 09:12:30
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c269315986

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-05-17 09:12:30
跑电泳看一下这两个峰的样品是否都含有你的目的蛋白

实验室只有SDS电泳,跑过了,两个峰都只有目的蛋白,但不清楚是单体还是多聚体,打算用分子筛看看。还是没搞明白为什么会变成双峰。

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3楼2017-05-17 11:19:25
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试试加大咪唑的浓度直接洗,跑电泳时一条带么
4楼2017-05-17 11:51:40
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